Análise das interações dos fatores EIF4G3 e EIF4G4 com proteínas parceiras na iniciação da tradução em Leishmania infantum

Abstract

Os tripanosomatídeos são protozoários flagelados que apresentam regulação da expressão gênica pós-transcricional. Em eucariotos, a iniciação da tradução começa com a ligação do complexo eIF4F (formado pelas proteínas eIF4A, eIF4E e eIF4G) ao cap presente na região 5’ dos mRNAs, permitindo seu reconhecimento pelo ribossomo. Em tripanosomatídeos, foram identificados cinco homólogos da subunidade eIF4G e dois deles, o EIF4G3 e EIF4G4, têm características compatíveis com o processo de tradução. Este trabalho teve por objetivo avaliar a viabilidade de células de Leishmania infantum submetidas à deleção dos genes EIF4G3 e EIF4G4 e caracterizar as interações das proteínas correspondentes e seus ligantes in vivo. Em ensaios de nocaute gênico, a deleção de um dos alelos de EIF4G3 e EIF4G4 não provocou alterações na morfologia e no crescimento celular. Em seguida, foram obtidas células promastigotas de L. infantum superexpressando as proteínas EIF4G3 e EIF4G4 selvagens ou mutantes em sítios de ligação para às proteínas parceiras EIF4E e EIF4A. Os resultados mostraram que às proteínas EIF4G3 e EIF4G4 foram expressas em duas isoformas, em perfil similar as proteínas endógenas. Entretanto, o mutante do EIF4G3 que não liga ao EIF4A1, apresentou uma isoforma e um perfil de expressão protéica diminuída. Os complexos coprecipitados in vivo foram identificados através de espectrometria de massas. Os dados mostram que as proteínas EIF4G3 e EIF4G4 selvagens interagem com seus parceiros EIF4E e EIF4A1, respectivamente, como já descrito. A associação com proteínas ribossomais e fatores de tradução, com os complexos eIF3 e eIF2, sugerem que as proteínas EIF4G3 e EIF4G4 estão envolvidas com a tradução. A análise dos mutantes do EIF4G3 demonstrou que os mesmos não interagiram com seus parceiros EIF4E4 e EIF4A1, e também com outros componentes da maquinaria de tradução. Este trabalho permitiu avançarmos na função das proteínas EIF4G3 e EIF4G4 na tradução, a partir das suas interações com demais proteínas em tripanosomatídeos.