Advisor | Melo, Fábio Lopes de | |
Author | Wanderley, Leandro Batista | |
Access date | 2023-10-25T13:46:52Z | |
Available date | 2023-10-25T13:46:52Z | |
Document date | 2011 | |
Citation | WANDERLEY, Leandro Batista. Avaliação da especificidade dos primers RV1 e RV2 para o diagnóstico molecular da leishimaniose visceral. 2011. 61 pilus. Dissertação, (mestrado)-Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2011. | en_US |
URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60902 | |
Abstract in Portuguese | A Leishmaniose Visceral (LV) é uma endemia de grande expansão geográfica e, na maioria das áreas endêmicas, co-existe com outras doenças. No Brasil há descrição, em vários municípios, de co-endemias tais como esquistossomose, tuberculose, doença de chagas e leishmaniose tegumentar americana, e estas apresentam manifestações clínicas semelhantes à LV, o que pode interferir na especificidade dos métodos diagnósticos convencionais. O minicírculo do kDNA é o alvo mais estudado e aplicado nas pesquisas da leishmaniose humana. Dentre os primers que tem o kDNA como alvo estão o RV1 e RV2, que já foram aplicados com sucesso em diversas amostras biológicas. Este trabalho teve como objetivo estudar a especificidade dos primers RV1 e RV2, através da técnica de PCR, utilizando DNA de diferentes organismos. Para isto, utilizou-se a ferramenta Primer-BLAST (NCBI), para observar, teoricamente, quais os organismos que possuem regiões para o anelamento dos primers; e, em laboratório, foram testados DNA genômico purificado de diversos organismos. A sensibilidade dos primers foi testada através de uma curva de diluição seriada utilizando o DNA genômico de Leishmania (Leishmania) chagasi para dois sistemas de volumes diferentes. O Sistema de PCR 2, com 50 µL, apresentou uma sensibilidade de 0,1fg, enquanto que o Sistema de PCR 1, com 25 µL, alcançou apenas 1 pg. Testando os primers dos sistemas de forma teórica (Primer-BLAST), estes mostraram-se específicos para Leishmania (Leishmania) major, Leishmania (Leishmania) donovani e Leishmania (Leishmania) infantum. Porém ao testar, em laboratório, o DNA dos organismos com o sistema de PCR 2, observou-se inespecificidade dos primers, que se anelaram frente ao DNA de Schistosoma mansoni e Trypanosoma cruzi, para as mesmas condições de ciclagem. Os resultados encontrados demonstram que os primers RV1 e RV2 não devem ser utilizados em regiões onde estes parasitos estão presentes, pois podem levar a resultados falso-positivos . | en_US |
Language | por | en_US |
Rights | open access | en_US |
Subject in Portuguese | Leishmaniose visceral | en_US |
Subject in Portuguese | Reação em Cadeia da Polimerase | en_US |
Subject in Portuguese | Especificidade | en_US |
Subject in Portuguese | Especificidade | en_US |
Title | Avaliação da especificidade dos primers RV1 e RV2 para o diagnóstico molecular da leishimaniose visceral | en_US |
Alternative title | Evaluation of the specificity of the primers RV1 and RV2 for the molecular diagnosis of visceral leishimaniose | en_US |
Type | Dissertation | en_US |
Defense date | 2011-03-31 | |
Departament | Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães | en_US |
Defense Institution | Fundação Oswaldo Cruz | en_US |
Degree level | Mestrado Acadêmico | en_US |
Place of Defense | Recife | en_US |
Program | Programa de Pós-Graduação em Saúde Pública | en_US |
Co-Advisor | Medeiros, Zulma Maria de | |
Abstract | The Visceral Leishmaniasis (VL) is endemic to a large geographic spread and, in most endemic areas, co-exist with other diseases. In Brazil there are descriptions, in various municipalities, of co-endemic diseases such as schistosomiasis, tuberculosis, chagas disease and american tegumentary leishmaniasis, and those with clinical symptoms similar to VL, which can interfere with the specificity of conventional diagnostic methods.The minicircle kDNA is the target most studied and applied in research of human leishmaniasis. Among the primers that target the kDNA, are RV1 and RV2, which has already been successfully applied in various biological samples. This work aimed to study the specificity of the primers RV1 and RV2, by PCR, using DNA from different organisms. For this, we used the PrimerBLAST tool (NCBI), to observe, theoretically, which organisms have regions for annealing of primers, and in the laboratory were tested purified genomic DNA of various organisms. The sensitivity of primers was tested by a serial dilution curve using genomic DNA from Leishmania (Leishmania) chagasi for two systems with different volumes. The PCR System 2, with 50 µL, showed a sensitivity of 0.1 fg, whereas the PCR System 1, with 25 µL, reached only 1 pg. Testing primers in a theoretical way (Primer-BLAST), they showed specificity for Leishmania (Leishmania) major, Leishmania (Leishmania) donovani and Leishmania (Leishmania) infantum. But when testing, in laboratory, the DNA of the organisms using the PCR system 2, was observed inspecificity of the primers, which showed amplification against the DNA of Schistosoma mansoni and Trypanosoma cruzi, using the same cycling conditions. The results show that the primers RV1 and RV2 must not be used in regions where these parasites are present, because they may lead to false positive resultsn . | en_US |
Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil. | en_US |
Affilliation | Universidade de Pernambuco. Recife, PE, Brasil. | en_US |
Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil. | en_US |
Subject | Visceral leishmaniasis | en_US |
Subject | Polymerase Chain Reaction | en_US |
Subject | Specificity | en_US |
Subject | DNA primers | en_US |
Subject in Spanish | leishmaniasis visceral | en_US |
Subject in Spanish | Reacción en cadena de la polimerasa | en_US |
Subject in Spanish | Especificidad | en_US |
Subject in Spanish | cebadores de ADN | en_US |
Subject in French | Leishmaniose viscérale | en_US |
Subject in French | Réaction en chaîne par polymérase | en_US |
Subject in French | Spécificité | en_US |
Subject in French | Amorces d'ADN | en_US |
Member of the board | Melo, Fábio Lopes de | |
Member of the board | Muniz, Maria Tereza Cartaxo | |
Member of the board | Cavalcanti, Milena Paiva | |
DeCS | Leishmaniose Visceral | en_US |
DeCS | Reação em Cadeia da Polimerase | en_US |
DeCS | Sensibilidade e Especificidade | en_US |
DeCS | Primers do Dna | en_US |