Ação terapêutica do CRISPR na herpes ocular em camundongos BALB/c infectados pelo aphaherpesvírus humano 1 (HSV-1)

Abstract

O alphaherpesvirus humano 1 ou vírus herpes simples do tipo 1 (HSV-1) é encontrado em 67% da população mundial adulta. Essa infecção pode causar a ceratoconjuntivite herpética, causa mais comum de cegueira infecciosa em países desenvolvidos. Nessa manifestação clínica, o vírus infecta as células da superfície ocular, o que leva à mialgia e ressecamento, perda de sensação local, conjuntivite, podendo evoluir para destruição da córnea e perda da visão. Quando o paciente não é tratado ou apresenta toxicidade e/ou resistência ao tratamento clínico convencional com o Aciclovir, a indicação é o transplante de córnea (ceratoplastia). No entanto, a rejeição da ceratoplastia ocorre em 15% a 56% dos casos mundialmente e em 36,8% dos casos no Brasil, tais dados apontam para a importância da busca por alternativas ao tratamento da ceratoconjuntivite herpética. O desenvolvimento de antivirais utilizando como ferramenta a tecnologia de edição do genoma viral (CRISPR/Cas9) vem sendo amplamente testada em modelos animais. Dessa forma, o objetivo do estudo foi avaliar a atividade antiviral do CRISPR/Cas9 anti-HSV-1 em comparação ao Aciclovir no tratamento da ceratoconjuntivite herpética em animais BALB/c infectados pelo HSV-1 e os níveis das citocinas TNF-α, IFN-γ, IL-5, IL-4 e IL-2. O modelo para ceratite herpética em camundongos BALB/c foi avaliado por meio da cinética de infecção (2°, 4°, 7° e 14° dpi) com diferentes inóculos virais (105 , 106 , 107 e 109 PFU/mL) e com uma e três doses do tratamento. Foram observadas como manifestações clínicas presença e escore de lesão ocular, alterações na pelagem e perda de peso corporal, além da quantificação da carga viral no globo ocular e nível sistêmico de citocinas. Inicialmente observamos que os camundongos infectados com 109 PFU/mL apresentaram todas as manifestações clínicas avaliadas e alta carga viral (1.7 x 108 cópias/mL). A terapia com CRISPR/Cas9 anti-HSV-1 reduziu a carga viral de 1 a 2 logs, bem como aumentou a produção de citocinas (138,7 pg/mL de TNF-α) durante a infecção, além de resolver (escore 0) ou minimizar as lesões oculares (escore 1 ou 2). Os resultados indicam o potencial do CRISPR/Cas9 para continuidade dos estudos visando uma aplicação alternativa no tratamento do herpes ocular