Isolamento, identificação e avaliação do perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos de Leptospira spp. isoladas de águas do Rio Carioca na cidade do Rio de Janeiro

Abstract

A leptospirose é uma zoonose global causada por espiroquetas do gênero Leptospira. A infecção em humanos geralmente ocorre pelo contato com água e solo, contaminados com a urina de animais infectados. O ambiente é a principal fonte de infecção que precisa ser investigado, levando em consideração os problemas relacionados ao processo de urbanização desordenada, que incluem condições inadequadas de saneamento básico e infraestrutura inadequada das cidades. Neste estudo, nós investigamos a presença de cepas de Leptospira spp. em cinco pontos do Rio Carioca, localizado na região metropolitana da cidade do Rio de Janeiro, o qual tem sofrido o impacto do processo de urbanização. Um total de 5 amostras foram coletadas de diferentes pontos do rio, usando tubos estéreis e foram filtradas em membranas de porosidade 0.45 µm e 0.22 µm, respectivamente. Um volume de 0,5 mL de cada amostra foi inoculado nos meios EMJH e Fletcher semi-sólidos, contendo 5-fluorouracil (100µg/mL). As culturas foram examinadas por microscopia de campo escuro, para evidenciar a morfologia do gênero Leptospira. O teste de aglutinação microscópica (MAT), utilizando um painel de 18 anti-soros de referência foi usado para sorotipagem das cepas isoladas. A detecção dos genes de patogenicidade (flaB e lipL41) e do marcador de gênero (rrs), foi realizada através da técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). O sequenciamento do gene ppk foi realizado para identificação das espécies. A suscetibilidade à penicilina, cefotaxima, ampicilina, doxiciclina e azitromicina foi testada pela técnica de microdiluição e a Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada. Cinco cepas de Leptospira sp. foram obtidas a partir das amostras testadas, correspondendo ao isolamento em 100% dos pontos de coleta O gênero foi confirmado para as cepas CLEP 00366 a 370, através da morfologia observada ao microscópio e pelo sequenciamento do gene rrs, o qual codifica a subunidade 16S do RNA ribossomal. A análise filogenética baseada no gene ppk, recentemente descrito como importante candidato para classificação filogenética, revelou uma correlação das cepas CLEP 00368, 00366 e 00370 com as espécies L. idonii (85,0%), L. noumeaensis (88,0%) e L. bandrabouensis (98,0%) respectivamente. Devido ao percentual de similaridade com espécies já conhecidas ter sido inferior a 98,7%, esse resultado pode indicar que estas cepas pertencem a espécies do gênero Leptospira ainda não descritas. Investigações futuras serão conduzidas para confirmar este resultado. A cepa CLEP 00367 mostrou uma correlação de 99% com a espécie L.bromii, anteriormente realcionada a doença em humanos. A cepa CLEP 00366 apresentou os maiores valores de CIM para todos os antibióticos testados, o que sugere a influência do impacto antropogênico sobre local de coleta, o qual possui considerável número de edificações no seu entorno, o que pode contribuir para o surgimento de cepas resistentes aos antibióticos. A cepa CLEP 00370 foi isolada do ponto mais degradado do Rio Carioca e apresentou os segundos maiores valores de CIM para penicilina, doxiciclina, cefotaxima e ampicilina, colaborando com a hipótese de que a contaminação pela ação humana pode influenciar no perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos. Considerando o impacto da leptospirose no conceito da Saúde Única, nossos resultados confirmam a importância da investigação da presença de Leptospira spp. no ambiente, que representa a maior fonte de contaminação para o homem e os animais.