| Advisor | Silva, Gilberto Marcelo Sperandio da | |
| Advisor | Barbosa Netto, Juliana dos Santos | |
| Author | Perlingeiro, Raíssa de Moraes | |
| Access date | 2024-03-25T18:36:14Z | |
| Available date | 2024-03-25T18:36:14Z | |
| Document date | 2021 | |
| Citation | PERLINGEIRO, Raíssa de Moraes. Implementação da técnica da PCR em tempo real para quantificação da carga viral do HHV-8/KSHV em pacientes infectados pelo HIV. 2021. 63 f. Dissertação (Mestrado Profissional em Pesquisa Clínica) - Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ, 2021. | en_US |
| URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/63202 | |
| Abstract in Portuguese | Introdução: O Sarcoma de Kaposi (SK) é a mais frequente neoplasia em pacientes vivendo com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) hoje, ainda que sua incidência tenha declinado desde a implementação da terapia antirretroviral (TARV), e continua sendo grande causa de morbimortalidade. O vírus denominado KSHV (Kaposi Sarcoma HerpesVirus) é o causador do SK e de outras doenças como a Doença Multicêntrica de Castleman e o linfoma de efusão primária, que podem ter apresentação clínica muito grave. A quantificação da carga viral do KSHV através do método da PCR (do inglês, polimerase chain reaction) pode ser usada no diagnóstico diferencial de doenças graves associadas a esse vírus. Justificativa: Sendo o Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas (INI) um serviço de referência para o tratamento de SK e AIDS, a quantificação do KSHV pela técnica da PCR é muito importante para o diagnóstico diferencial nos pacientes graves, agilizando a tomada de conduta terapêutica. Objetivo Geral: Implementar a técnica da PCR em tempo real para quantificação da carga viral do KSHV, em plasma ou soro, de pacientes infectados pelo HIV e diagnóstico de Sarcoma de Kaposi, que apresentem formas clínicas graves, bem como para auxiliar no diagnóstico de outras doenças associadas ao KSHV. Metodologia: Amostras de material biológico (plasma EDTA e soro) coletadas de pacientes que iniciaram tratamento quimioterápico para SK no INI do ano de 2011 a 2013 foram processadas para realização da quantificação da carga viral do KSHV através de técnica de qPCR Resultados: Não foi possível a implementação utilizando-se metodologia de curva padrão com curva sintética fita simples por não hibridização completa com o DNA viral, o que poderia comprometer o resultado do exame. Dessa forma, foi criada uma curva sintética fita dupla que ainda precisa de aperfeiçoamento para ser implementada. Discussão: Optamos por manter a utilização do plasmídeo para quantificação da carga viral do KSHV enquanto, em projeto futuro, melhoraremos a performance da curva sintética fita dupla para que sua utilização possa ser validada, visto que essa metodologia é mais reprodutível e menos laboriosa. Conclusão: A técnica de qPCR foi padronizada para os equipamentos disponíveis na Plataforma Multiusuário do INI. Além disso, foi elaborado fluxograma para orientação da coleta do material a ser examinado, incluindo suas indicações clínicas | en_US |
| Language | por | en_US |
| Rights | open access | en_US |
| Subject in Portuguese | AIDS | en_US |
| Subject in Portuguese | HIV | en_US |
| Subject in Portuguese | Sarcoma de Kaposi | en_US |
| Subject in Portuguese | KSHV | en_US |
| Subject in Portuguese | HHV-8 | en_US |
| Subject in Portuguese | KICS | en_US |
| Title | Implementação da técnica da PCR em tempo real para quantificação da carga viral do HHV-8/KSHV em pacientes infectados pelo HIV | en_US |
| Type | Dissertation | en_US |
| Defense date | 2021 | |
| Departament | Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas | en_US |
| Defense Institution | Fundação Oswaldo Cruz | en_US |
| Degree level | Mestrado Profissional | en_US |
| Place of Defense | Rio de Janeiro/RJ | en_US |
| Program | Programa de Pós-Graduação em Pesquisa Clínica | en_US |
| Abstract | Background: Kaposi's sarcoma (KS) is the most common neoplasm in patients living with the human immunodeficiency virus (HIV) today, although its incidence has declined since the implementation of antiretroviral therapy (ART) and remains a major cause of morbidity and mortality. The KSHV (Kaposi Sarcoma Herpes Virus) is the cause of KS and other serious diseases, such as Castleman's Multicentric Disease and Primary Effusion Lymphoma. The quantification of KSHV viral load using the PCR method (Polymerase Chain Reaction) can be used in the differential diagnosis of serious diseases associated with this virus. Purpose: As the National Institute of Infectious Diseases Evandro Chagas (INI) is a reference service for the treatment of KS and AIDS, the quantification of KSHV by the PCR method is important for the differential diagnosis in critically ill patients, accelerating the choice of the appropriate treatment. Main goal: To implement the real-time PCR method to quantify KSHV in serum or plasma of critically ill HIV-infected patients with a diagnosis of KS, as well as to assist in the diagnosis of other KSHV-associated diseases. Methods: EDTA plasma and serum samples collected from patients who started chemotherapy for KS at INI from 2011 to 2013 were processed to quantify HHV-8 using the qPCR method Results: It was not possible to implement the technic creating a standard curve with a single curve synthetic oligonucleotide probably because of incomplete hybridization with viral DNA, which could compromise the test result. Thus, a double-stranded synthetic oligonucleotide was designed, but it still needs to be improved before its implementation. Discussion: The plasmid method will be used to quantify the HHV-8 viral load while, in a future project, we will improve the performance of the double stranded synthetic oligonucleotide we designed, so that its use can be validated, since this methodology is more reproducible and less timing consuming. Conclusion: The qPCR technique was standardized for the equipment available on INI's Multi-User Platform. In addition, a flow chart for collection of specimen, including its clinical indications, was elaborated | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Subject | AIDS | en_US |
| Subject | HIV | en_US |
| Subject | Kaposi’s Sarcoma | en_US |
| Subject | KSHV | en_US |
| Subject | HHV-8 | en_US |
| Subject | KICS | en_US |
| DeCS | HIV | en_US |
| DeCS | Herpesvirus Humano 8 | en_US |
| DeCS | Sarcoma de Kaposi | en_US |
