Atividade de moléculas imunoreguladoras e efetoras na recuperação medular pós quimioterapia e seu valor prognóstico nas leucemias

Abstract

A medula óssea é o principal órgão de repovoamento hematológico, seu microambiente é formado por uma complexa rede de interações, com células, moléculas, citocinas e vesículas. Essa rede interação é responsável pela manutenção da homeostasia e pela regulação da hematopoiese. Portanto, a desregulação nesse microambiente pode estar diretamente relacionada a proliferação e a fixação do clone leucêmico. Nesse estudo visamos descrever o microambiente medular, seus componentes celulares, a expressão de proteínas e moléculas imunomoduladoras, além da identificação de vesículas extracelulares, para compreender como esses fatores impactam no prognóstico de pacientes com leucemia aguda ao diagnóstico e no decorrer do tratamento. Avaliamos 40 pacientes pediátricos com diagnóstico de LLA-B (n: 15), LLA-T(n:9) e LMA (n:16). As amostras foram submetidas a painéis de marcação com anticorpos e analisadas através da citometria de fluxo. Para a identificação celular as amostras também foram submetidas ao controle de viabilidade, com 7AAD. Utilizamos as amostras ao diagnóstico de 20 pacientes. Para os pacientes com LLA, constatamos um aumento na expressão das moléculas de adesão CD44, CD9, além de um aumento na molécula moduladora PD1. Para os pacientes com LMA, averiguamos um aumento na expressão das moléculas CD44, CD9 e CD31 e para as moléculas moduladoras HLA-G e PD1. Para as vesículas, utilizamos 20 amostras de estroma medular de pacientes ao diagnóstico e na DRM, após a fase de indução. O estroma medular foi submetido ao protocolo de isolamento através da ultracentrifugação, sendo esse concentrado submetido a caracterização e validação. Através da MET, DLS e da nanocitometria, identificamos um concentrado heterogêneo de vesículas, e a expressão de marcadores característicos de VEs, como anexina e CD9. Ademais, as VEs secretadas pelas células leucêmicas não apresentaram resultados estatisticamente significativos, contudo, identificamos uma assimetria na relação do número de partículas e expressão de marcadores de superfície, além disso, constatamos que os pacientes com LLA-T secretam mais VEs e expressam mais HLA-G, achado esse não similar ao que encontramos no perfil celular. No mais, torna-se necessário a continuidade desse estudo, através da expansão do painel de identificação celular, além de utilizar os mesmos pacientes para os painéis de células e de VEs, aumentando a rastreabilidade das moléculas. .