| Author | Vidal, Luãnna Elisa Liebscher | |
| Author | Figueira-Mansur, Janaina | |
| Author | Jurgilas, Patrícia Barbosa | |
| Author | Argondizzo, Ana Paula Correa | |
| Author | Pestana, Cristiane Pinheiro | |
| Author | Martins, Fernanda Otaviano | |
| Author | Silva Junior, Haroldo Cid da | |
| Author | Miguez, Mariana | |
| Author | Loureiro, Bernardo Oliveira | |
| Author | Marques, Christiane de Fatima Silva | |
| Author | Trinta, Karen Soares | |
| Author | Silva, Leila Botelho Rodrigues da | |
| Author | Mello, Marcelle Bral de | |
| Author | Silva, Edimilson Domingos da | |
| Author | Bastos, Renata Chagas | |
| Author | Esteves, Gabriela | |
| Access date | 2024-07-18T17:44:04Z | |
| Available date | 2024-07-18T17:44:04Z | |
| Document date | 2023 | |
| Citation | VIDAL, Luãnna Elisa Liebscher et al. Process development and characterization of recombinant nucleocapsid protein for its application on COVID-19 diagnosis. Protein Expression and Purification, v. 207, p. 1-10, Jul. 2023. | en_US |
| ISSN | 1046-5928 | en_US |
| URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/65053 | |
| Language | eng | en_US |
| Publisher | Elsevier | en_US |
| Rights | open access | en_US |
| Title | Process development and characterization of recombinant nucleocapsid protein for its application on COVID-19 diagnosis | en_US |
| Type | Article | en_US |
| DOI | 10.1016/j.pep.2023.106263 | |
| Abstract | COVID-19 pandemic was caused by the severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (Sars-CoV-2). The nucleocapsid (N) protein from Sars-CoV-2 is a highly immunogenic antigen and responsible for genome packing. Serological assays are important tools to detect previous exposure to SARS-CoV-2, complement epidemiological studies, vaccine evaluation and also in COVID-19 surveillance. SARS-CoV-2 N (r2N) protein was produced in Escherichia coli, characterized, and the immunological performance was evaluated by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and beads-based array immunoassay. r2N protein oligomers were evidenced when it is associated to nucleic acid. Benzonase treatment reduced host nucleic acid associated to r2N protein, but crosslinking assay still demonstrates the presence of higher-order oligomers. Nevertheless, after RNase treatment the higher-order oligomers reduced, and dimer form increased, suggesting RNA contributes to the oligomer formation. Structural analysis revealed nucleic acid did not interfere with the thermal stability of the recombinant protein. Interestingly, nucleic acid was able to prevent r2N protein aggregation even with increasing temperature while the protein benzonase treated begin aggregation process above 55 ◦C. In immunological characterization, ELISA performed with 233 serum samples presented a sensitivity of 97.44% (95% Confidence Interval, CI, 91.04%, 99.69%) and a specificity of 98.71% (95% CI, 95.42%, 99.84%) while beads-based array immunoassay carried out with 217 samples showed 100% sensitivity and 98.6% specificity. The results exhibited an excellent immunological performance of r2N protein in serologic assays showing that, even in presence of nucleic acid, it can be used as a component of an immunoassay for the sensitive and specific detection of SARS-CoV-2 antibodies. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Macromoléculas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia Recombinante. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Macromoléculas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia Recombinante. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia Recombinante. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia Recombinante. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia Imunológica. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia Recombinante. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia de Diagnóstico. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia de Diagnóstico. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia de Diagnóstico. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia de Diagnóstico. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia de Diagnóstico. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia de Diagnóstico. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Macromoléculas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Laboratório de Tecnologia Recombinante. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
| Subject | COVID-19 | en_US |
| Subject | Immunological test | en_US |
| Subject | Structural characterization | en_US |
| Subject | Heterologous protein production | en_US |
| Subject | SARS-CoV-2 | |
| Subject | SARS-CoV-2 N (r2N) protein | |
