Avaliação da influência do glicerol no sinal de quimiluminescência e da densidade óptica em amostras séricas glicerinadas

Abstract

Introdução: Imunoensaios são testes empregados na detecção seletiva de analitos em amostras biológicas, usando antígenos ou anticorpos como agentes de reconhecimento biológico. O sinal gerado ao final das reações indica a concentração do analito, o qual é diretamente dependente da sua conservação. Em imunoensaios indiretos, o sinal provém de anticorpos, os quais são sensíveis à desnaturação quando submetidos à ciclos repetidos de congelamento/descongelamento e à diminuição na estabilidade quando amostras biológicas são excessivamente diluídas. O uso de conservantes pode ser útil na estabilidade dos anticorpos, prevenindo a desnaturação e consequente perda de sinal em imunoensaios indiretos. Objetivo (s): Avaliar a influência do glicerol no sinal de quimiluminescência (QML) e densidade óptica (DO) de imunoensaios indiretos. Material e Métodos: Para a avaliação da influência do glicerol no sinal de QML, vinte amostras séricas positivas para Trypanosoma cruzi foram utilizadas para formar cinco pools. Já para a avaliação da DO, foram usadas 42 amostras positivas para T. cruzi e 42 negativas. A QML foi avaliada através da reação de Western blot enquanto a DO por ELISA indireto, conforme metodologias padronizadas por nosso grupo. Todas as amostras foram analisadas em duplicata, sendo uma delas em estado nativo e a outra glicerinada. Ao final das reações, os sinais foram comprados e análise quanto à perda de sinal e desempenho dos testes foram realizados por regressão de Deming, Bland-Altmen e tabela de dupla entrada. Resultados e Conclusão: No ELISA indireto, foi verificado que o índice médio de reatividade foi maior quando as amostras glicerinadas foram testadas. De fato, o sinal médio das amostras negativas foi 6 vezes maior no grupo de amostras glicerinadas (p < 0,0001). Similarmente, o sinal das amostras positivas glicerinadas foi significativamente superior ao sinal das amostras nativas, mas não tão exuberante quanto ao observado para as amostras negativas (1,3 vez; p < 0,0001). Para a análise do sinal de QML, somente amostras positivas foram analisadas. Nesta situação, não houve diferença de sinal entre amostras glicerinadas e não glicerinadas. O uso da glicerina na conservação de amostras biológicas é uma estratégia na manutenção do sinal de imunoensaios indiretos. Apesar da elevação da DO, não houve alteração significativa dos valores de sensibilidade e especificidade dos testes realizados.