Amplificação de ácidos nucleicos pela técnica de LAMP como alternativa para o diagnóstico de leishmanioses e COVID-19

Abstract

A qRT-PCR é a técnica utilizada como padrão ouro para diagnóstico de COVID-19 e também é considerada um método sensível para diagnóstico das leishmanioses. Entretanto, seu custo elevado e necessidade de mão de obra qualificada limitam e inviabilizam sua aplicação em larga escala ou em campo. Sabe-se que a evolução de ambas as doenças depende da resposta imunológica do indivíduo que, aliada à dificuldade de acesso da população aos testes diagnósticos, resulta na subnotificação do número de casos, dificultando seu controle pelos órgãos de saúde pública. Até o início de outubro mais de 1 milhão de mortes por COVID-19 foram registrados e mais de 1 bilhão de pessoas estão sob risco de infecção por Leishmania. Diante disto, a técnica de amplificação isotérmica mediada por alça (LAMP) se mostra uma alternativa promissora para auxílio do diagnóstico destas doenças por ser de fácil execução, rápida e de baixo custo, sendo ideal sua aplicação no formato point-of-care (PoC). Os resultados obtidos neste trabalho mostraram, pela primeira vez, a identificação concomitante por LAMP das espécies de Leishmania infantum e L. braziliensis em amostras clínicas de cães com leishmaniose visceral (LV) e humanos com leishmaniose cutânea (LC), apresentando sensibilidades iguais a 88% e 58%, respectivamente. Além disso, a detecção do gene N de SARS-CoV-2 em swab nasofaríngeo apresentou até 97% de sensibilidade e 100% de especificidade, sendo possível mesmo quando não há extração de material genético, com ausência de reação cruzada com outros vírus respiratórios. Por se apresentar altamente específica, com sensibilidade satisfatória, ser rápida e de fácil execução, a viabilidade da aplicação da técnica em locais remotos e podem agilizar o processo de triagem de amostras clínicas. Tais características podem complementar e suprir as limitações da utilização da q-PCR no diagnóstico, mostrando-se como uma ferramenta promissora no auxílio de rastreamento e controle destas doenças.