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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/66282
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BIOMPHALARIA GLABRATA (MOLLUSCA: GASTROPODA) SUSCETÍVEL E PARCIALMENTE RESISTENTE: CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA DE CÉLULAS DA GLÂNDULA DIGESTIVA E ESTUDO DO CARÁTER HEREDITÁRIO DO STATUS DE SUSCETIBILIDADE A SCHISTOSOMA MANSONI (TREMATODA: DIGENEA)
caracterização celular
moluscos hospedeiros
citometria de fluxo por imagem
interação Biomphalaria-S. mansoni
cell characterization
host snails
image flow cytometry
Biomphalaria-S. mansoni interaction
Moluscos/parasitologia
Citometria de Fluxo/métodos
Interação Hospedeiro-Patógeno
Fonseca, Cristhiane Oliveira | Data do documento:
2021
Autor(es)
Orientador
Coorientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brazil.
Resumo
A espécie de molusco de água doce Biomphalaria glabrata (Say, 1818) possui maior importância na transmissão, nas Américas, do parasito Schistosoma mansoni Sambon, 1907, causador da esquistossomose mansoni. A doença é considerada grande problema em saúde pública e atinge principalmente populações carentes de condições sanitárias. Uma vez que o parasito apresenta passagem obrigatória em moluscos Biomphalaria (Preston, 1910), estratégias de controle desses hospedeiros invertebrados são muito importantes para a eliminação da doença. Portanto, este trabalho busca contribuir para o maior entendimento das interações parasito-hospedeiro através da caracterização fenotípica das células presentes na glândula digestiva de populações de B. glabrata parcialmente resistente e altamente suscetível e avaliação do caráter hereditário do status de suscetibilidade de sua prole frente a diferentes cargas parasitárias de S. mansoni. Através de citometria de fluxo por imagem, células da glândula digestiva de moluscos melânicos parcialmente resistentes (BS-16) e suscetíveis (BB-02) foram caracterizadas morfologicamente, na ausência e após estímulo in vitro com PMA, e marcadas por lectinas fluorescentes. Para isso, foi estabelecido um protocolo de extração, processamento e marcação celular. Além disso, foram realizados cruzamentos entre as populações: BS-16 x BC-00 (população albina e suscetível), para avaliação da biologia reprodutiva, taxa de infecção e índice de compatibilidade a S. mansoni. Foram caracterizadas por citometria cinco subpopulações celulares, com predominância significativa de células de menor diâmetro (R1 e R2). Foram identificadas células digestivas em quatro fases de maturação e células calcíferas, além de células semelhantes às de defesa de Biomphalaria, em menor frequência. Não houve diferenças significativas na composição das células e exibição dos carboidratos de membrana estudados após ativação por PMA. A geração F1 resultante de moluscos albinos suscetíveis fecundados por melânicos parcialmente resistentes foi composta por moluscos melânicos (> 90%) com diferentes padrões de pigmentação e moluscos albinos. Estes moluscos F1 foram desafiados e os melânicos apresentaram grau de compatibilidade de quatro e dois graus menos compatíveis que os controles suscetíveis, quando expostos a 8 mir/mol e 20 mir/mol respectivamente. Por outro lado, os albinos tiveram altas taxas de infecção, independente da carga parasitária. Todos os grupos de moluscos analisados apresentaram bom desempenho reprodutivo.
Resumo em Inglês
The freshwater snail specie Biomphalaria glabrata (Say, 1818) has greater importance in the transmission, in the America, of the parasite Schistosoma mansoni Sambon, 1907, that causes the schistosomiasis mansoni. The disease is considered a major public health problem and affects mainly populations with poor sanitary conditions. Since the parasite must pass through Biomphalaria snails (Preston, 1910), the control of these invertebrate hosts is an important strategy for the elimination of the disease. Therefore, this work seeks to contribute to a better understanding of host-parasite interactions through the phenotypic characterization of cells present in the digestive gland of populations of partially resistant and highly susceptible B. glabrata and evaluation of the hereditary character of the susceptibility status of their offspring against different parasitic loads of S. mansoni. Through imaging flow cytometry, digestive gland-cells of partially resistant and melanic (BS-16) and susceptible (BB-02) snails were morphologically characterized, in the absence and after in vitro stimulation with PMA, and labeled by fluorescent lectins. For this, a protocol for cell extraction, processing and marking was established. In addition, crosses between populations were performed: BS-16 x BC-00 (albino and susceptible population), to evaluate the reproductive biology, infection rate and compatibility index with S. mansoni. Five cell subpopulations were characterized by cytometry, with a predominance of smaller diameter cells (R1 and R2). Digestive cells in four stages of maturation and calciferous cells were identified, in addition to cells similar to those of Biomphalaria defense, at a lower frequency. There were no significant differences in cell composition and membrane carbohydrate display studied after activation by PMA. The resulting F1 generation of susceptible albino snails fertilized by partially resistant melanin was composed of melanin snails (> 90%) with different pigmentation patterns and albino snails. These F1 snails were challenged and the melanics presented a compatibility index to four and two points less compatible when compared to susceptible controls when exposed to 8 mir/mol and 20 mir/mol respectively. On the other hand, albinos had high infection rates of infection, regardless of the parasite load. All groups of snails demonstrated good reproductive performance.
Palavras-chave
esquistossomosecaracterização celular
moluscos hospedeiros
citometria de fluxo por imagem
interação Biomphalaria-S. mansoni
Palavras-chave em inglês
schistosomiasiscell characterization
host snails
image flow cytometry
Biomphalaria-S. mansoni interaction
DeCS
Esquistossomose/parasitologiaMoluscos/parasitologia
Citometria de Fluxo/métodos
Interação Hospedeiro-Patógeno
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