Expressão e possível papel funcional da galectina-3 no timo de camundongos diabéticos não-obesos (NOD)

Abstract

A galectina-3 pertence à família de lectinas endógenas que se ligam a -galactosídeos presentes na superfície celular e glicoproteínas de matriz extracelular. Está envolvida em múltiplas funções biológicas como crescimento celular, adesão, proliferação e apoptose. Além disso, a galectina-3 é encontrada em diversos tecidos e órgãos, sendo altamente conservada nas espécies animais. Trabalhos recentes relacionaram a galectina-3 com doenças autoimunes com a diabetes mellitus insulino-dependente. Esta doença é caracterizada pela destruição de células -pancreáticas pelas células T autorreatives e por autoanticorpos. Camundongos NOD representam um modelo adequado para estudar a diabetes autoimume, pois desenvolvem a doença espontaneamente de modo similar aos humanos. Dados prévios do nosso grupo mostraram importantes alterações no timo destes animais como o desenvolvimento de espaços perivasculares gigantes, entremeados por uma rede de matriz extracelular, sugerindo uma deficiência na saída destas células maduras deste órgão. Este defeito é associado com uma baixa expressão do receptor de fibronectina VLA-5. Considerando que a galectina-3 é uma proteina expressa no timo e recentemente relacionada com a patogenênese da diabetes tipo 1, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de galectina-3 e o possível papel funcional desta lectina no timo de camundongos NOD. Para atender este objetivo analisamos a expressão de galectina-3 no timo destes animais por imunohistoquímica, a ligação de galectina-3 nos timócitos por citometria de fluxo, a capacidade migratória dos timócitos em presença de galectina-3 e fibronectina em sistema de câmaras de Transwell, além da saída dos timócitos do timo influenciados pela galectina-3. Nós observamos um aumento significativo de células positivas para galectina-3 no timo de camundongos NOD, principalmente na medula. Além disso, observamos um aumento significativo da ligação de galectina-3 em CD4-CD8- (duplo-negativo) e uma diminuição em CD8 simples positivo, quando comparado com timócitos BALB/c. De modo interessante, verificamos que timócitos de NOD tratados com galectina-3 migram menos comparados aos timócitos controles. Este resultado nos levou a formular a hipótese de que a migração sob estímulo da galectina-3 era dependente de VLA-5. Ensaios de bloqueio com anticorpo anti-VLA-5 mostraram que timócitos migram menos na presença da lectina quando seu receptor VLA-5 era bloqueado, confirmando nossa hipótese. Por fim, observamos que a migração transendotelial de timócitos de NOD sob influência de galectina-3 é deficiente, sugerindo que a lectina exerça um papel importante na emigração destas células para a periferia.