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AutorFreitas, Bethânia Alves de Avelar
AutorAlmeida, Valéria Gomes
AutorPinto, Mauro Cunha Xavier
AutorMourão, Flávio Afonso Gonçalves
AutorMassensini, Andre Ricardo
AutorMartins Filho, Olindo Assis
AutorVieira, Etel Rocha
AutorMelo, Gustavo Eustáquio Brito Alvim de
Fecha de acceso2015-01-28T15:33:09Z
Fecha de disponibilización2015-01-28T15:33:09Z
Fecha de publicación2014
ReferenciaFREITAS, Bethânia Alves de Avelar, et al. Trypan blue exclusion assay by flow cytometry. Braz J Med Biol Res; v. 47, n. 4, p. 307-15, 2014pt_BR
ISSN0100-879X
URIhttps://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/9397
Idiomaengpt_BR
EditorAssociação Brasileira de Divulgação Científicapt_BR
Derechos de autoropen accesspt_BR
TítuloTrypan blue exclusion assay by flow cytometrypt_BR
Tipo del documentoArticlept_BR
DOI10.1590/1414-431X20143437
Resumen en InglésDye exclusion tests are used to determine the number of live and dead cells. These assays are based on the principle that intact plasma membranes in live cells exclude specific dyes, whereas dead cells do not. Although widely used, the trypan blue (TB) exclusion assay has limitations. The dye can be incorporated by live cells after a short exposure time, and personal reliability, related to the expertise of the analyst, can affect the results. We propose an alternative assay for evaluating cell viability that combines the TB exclusion test and the high sensitivity of the flow cytometry technique. Previous studies have demonstrated the ability of TB to emit fluorescence when complexed with proteins. According to our results, TB/bovine serum albumin and TB/cytoplasmic protein complexes emit fluorescence at 660 nm, which is detectable by flow cytometry using a 650-nm low-pass band filter. TB at 0.002% (w/v) was defined as the optimum concentration for distinguishing unstained living cells from fluorescent dead cells, and fluorescence emission was stable for 30 min after cell treatment. Although previous studies have shown that TB promotes green fluorescence quenching, TB at 0.002% did not interfere with green fluorescence in human live T-cells stained with anti-CD3/fluorescein isothiocyanate (FITC) monoclonal antibody. We observed a high correlation between the percentage of propidium iodide+CD3/FITC+ and TB+CD3/FITC+ cells, as well as similar double-stained cell profiles in flow cytometry dot-plot graphs. Taken together, the results indicate that a TB exclusion assay by flow cytometry can be employed as an alternative tool for quick and reliable cell viability analysis.pt_BR
AfiliaciónUniversidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri. Departamento de Farmácia. Laboratório de Imunologia. Diamantina, MG, Brasil.pt_BR
AfiliaciónUniversidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri. Departamento de Farmácia. Laboratório de Imunologia. Diamantina, MG, Brasilpt_BR
AfiliaciónUniversidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Fisiologia e Farmacologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.pt_BR
AfiliaciónUniversidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Fisiologia e Farmacologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.pt_BR
AfiliaciónUniversidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Departamento de Fisiologia e Farmacologia. Belo Horizonte, MG, Brasil.pt_BR
AfiliaciónFundação Osvaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Laboratório de Biomarcadores de Diagnóstico e Monitoração Belo Horizonte, MG, Brasil.pt_BR
AfiliaciónUniversidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri. Departamento de Farmácia. Laboratório de Imunologia. Diamantina, MG, Brasil.pt_BR
AfiliaciónUniversidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri. Departamento de Farmácia. Laboratório de Imunologia. Diamantina, MG, Brasil.pt_BR
Palavras clave en InglêsTrypan bluept_BR
Palavras clave en InglêsFluorescencept_BR
Palavras clave en InglêsFlow cytometrypt_BR
Palavras clave en InglêsCytotoxicitypt_BR


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