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Title: Avaliação do efeito do derivado de β-lapachona R72 em formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi e na infecção de macrófagos pelo T. cruzi in vitro
Advisor: Santos, Marcos André Vannier dos
Members of the board: Soeiro, Maria de Nazaré
Macambira, Simone Garcia
Andrade, Sonia Gumes
Authors: Anjos, Danielle Oliveira dos
Coadvisor: Santos, Fabricio Rios dos
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
Abstract: A tripanossomíase americana também conhecida como doença de Chagas é um importante problema de saúde pública, uma doença de origem parasitária que afeta 8 milhões de pessoas na América Latina (OMS, 2013). Atualmente existem apenas dois fármacos utilizados na prática clínica: o benzonidazol e o nifurtimox. Esse último não é usado no Brasil. Esses fármacos apresentam efeitos colaterais e são confrontados com cepas resistentes (FILARDI e BRENER, 1987; MEJIA et al., 2012). Desta forma, torna-se necessária a busca de compostos que apresentem maior eficácia e menor toxicidade. No presente trabalho foi avaliado o efeito do composto derivado de β–lapachona, R72, em formas tripomastigotas de T. cruzi e em macrófagos infectados in vitro. Observamos que a R72 reduziu, significativamente (p<0,05), o número de parasitos viáveis, produzindo IC50 de 15 μM. A análise ultraestrutural revelou que a R72 causou danos na bolsa flagelar, cinetoplasto e mitocôndrias. Além disso, encontramos a presença de corpúsculos lipídicos e figuras de mielina no citoplasma do protozoário, indicando processos de autofagia, a qual foi confirmada pela sonda MDC. A análise por citometria de fluxo indicou morte por apoptose, necrose e produção de espécies reativas de oxigênio. Além disso, o composto não apresentou toxicidade para células de mamíferos em concentrações inferiores a 200 μM. A R72 reduziu, significativamente, a percentagem de macrófagos infectados pelo T. cruzi e o número de parasitos por macrófagos. Verificamos inibição da internalização de parasitos quando os macrófagos foram tratados previamente com o composto R72. Análise ultra-estrutural evidenciou um processo de autofagia caracterizado pela presença de vacúolo autofágico e formação de corpúsculos lipídicos. O mecanismo envolvido na formação de vacúolos autofágicos e corpúsculos lipídicos é independente da produção de óxido nítrico. Esses resultados ajudam a elucidar os mecanismos de ação de fármacos potenciais para a quimioterapia da doença de Chagas.
Abstract: The American trypanosomiasis also known as Chagas disease is a major public health problem, a parasitic disease caused that affects 8 million people in Latin America (OMS, 2013). Currently there are only two drugs used in clinical practice: the benznidazole and the nifurtimox. The latter is not used in Brazil. These drugs are faced with considerable side effects and resistant strains (FILARDI e BRENER, 1987; MEJIA et al., 2012). Thus the search for drugs effective in the chronic phase of the disease and lower toxicity is required. In this study the effect of the β-lapachone derivative R72 in trypomastigote forms of T. cruzi and upon the infection of macrophage by T. cruzi in vitro. We observed that the R72 significantly inhibited (p<0,05) the number of viable parasites, producing IC50 of 15 μM. The ultrastructural analysis by transmission electron microscopy revealed that the R72 has caused damage to the flagellar pocket, kinetoplast and mitochondria. Furthermore, we found the presence of lipid bodies and myelin figures in the cytoplasm of the protozoan indicating autophagic process, which was confirmed by the MDC probe. Analysis by flow cytometry indicated death by apoptosis and necrosis and production of reactive of reactive oxygen species. Furthermore, the compound did not show toxicity to mammalian cells at concentrations below 200 μM. The R72 significantly reduced the percentage of infected macrophages and the number of number of T. cruzi parasites per macrophage. We observed inhibition of internalization of parasites when macrophage were pretreated with the compound R72. Ultrastructural analysis revealed a process of autophagy characterized by the presence of autophagic vacuoles and lipid body formation. The mechanism involved in the formation of autophagic vacuoles and lipid body is independent of nitric oxide. These results help elucidating the mechanisms action of potential drugs and provide new tools for chemotherapy of Chagas disease.
Keywords: Trypanosoma cruzi
Ultrastructure
Chemotherapy
keywords: Trypanosoma cruzi
Ultraestrutura
Quimioterapia
Issue Date: 2014
Citation: ANJOS, D. O. dos Avaliação do efeito do derivado de β-lapachona R72 em formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi e na infecção de macrófagos pelo T. cruzi in vitro. 2014. 99 f. il. Tese (Doutorado em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa) – Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, Salvador, 2014.
Date of defense: 2014
Place of defense: Salvador/ Ba
Department: Departamento de Vice Diretoria e Ensino
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz
Program: Pós-Graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa
Copyright: open access
Appears in Collections:BA - IGM - Teses de Doutorado

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