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VALIDATION OF A QUANTITATIVE REAL-TIME PCR ASSAY FOR HTLV-1 PROVIRAL LOAD IN PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS
Rosadas, Carolina et al. | Date Issued: 2013
Author
Rosadas, Carolina
Castro, Mauro Jorge Cabral
Vicente, Ana Carolina Paulo
Peralta, José Mauro
Puccioni-Sohler, Marzia
Affilliation
Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Faculdade de Medicina. Programa de Pós Graduação em Doenças Infecciosas e Parasitárias. Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF). Serviço de Patologia Clínica. Laboratório de Líquido Cefalorraquiano. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Faculdade de Medicina. Programa de Pós Graduação em Doenças Infecciosas e Parasitárias. Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF). Serviço de Patologia Clínica. Laboratório de Líquido Cefalorraquiano. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Universidade Federal do Rio de Janeiro. Programa de Pós-Graduação do Instituto de Microbiologia Paulo Góes. Laboratório de Diagnóstico Imunológico e Molecular de Doenças Infecciosas e Parasitárias. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Genética de Microorganismos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro. Programa de Pós-Graduação do Instituto de Microbiologia Paulo Góes. Laboratório de Diagnóstico Imunológico e Molecular de Doenças Infecciosas e Parasitárias. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ). Faculdade de Medicina. Programa de Pós Graduação em Doenças Infecciosas e Parasitárias. Hospital Universitário Clementino Fraga Filho (HUCFF). Serviço de Patologia Clínica. Laboratório de Líquido Cefalorraquiano. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro (UNIRIO). Escola de Medicina e Cirurgia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract
The objective of this study was to validate a TaqMan real-time PCR assay for HTLV-1 proviral load detection in peripheral blood mononuclear cells. TARL-2 cells were used to generate a standard curve. Peripheral blood mononuclear cell gDNA from 27 seropositive and 23 seronegative samples was analyzed. The sensitivity, specificity, accuracy, precision, dynamic range of the standard curve and qPCR efficiency were evaluated. All of the positive samples amplified the target gene. All of the negative samples amplified only the control gene (β-actin). The assay presented 100% specificity and sensibility. The intra- and inter-assay variability was 2.4% and 2.2%, respectively. The qPCR efficiency, slope and correlation coefficients (r2) were all acceptable. The limit of detection was 1 copy/rxn. This assay can reliably quantify HTLV-1 proviral load.
Keywords
HTLV-1
Real-time PCR
Proviral load
PBMCs
 
DeCS
Vírus 1 Linfotrópico T Humano
Publisher
Elsevier
Citation
ROSADAS, Carolina; et al. Validation of a quantitative real-time PCR assay for HTLV-1 proviral load in peripheral blood mononuclear cells. Journal of Virological Methods, v.193, n.2, p.536-541, Nov. 2013.
DOI
10.1016/j.jviromet.2013.07.040
ISSN
0166-0934