Pré-validação do ensaio imunoenzimático de quantificação do teor de ovoalbumina na vacina contra febre amarela

Abstract

Sistemas de garantia da qualidade como as Boas Práticas de Fabricação e a ISO/IEC 17025 requerem o uso de procedimentos analíticos propriamente validados. Validação é o processo pelo qual a confiabilidade, uma medida objetiva da reprodutibilidade intra e inter-laboratorial, e a sua relevância são avaliadas com o objetivo de dar suporte a um uso específico. Os níveis de confiabilidade e relevância necessários dependerão das condições sob as quais o teste será usado e os propósitos para os quais seus resultados serão aplicados. Na prática, o objetivo da validação é dar ao laboratório assim como às autoridades, garantia de que cada resultado que será obtido na rotina estará suficientemente próximo ao valor “real” desconhecido da amostra. Os métodos clássicos de validação e de controle da qualidade avaliam a magnitude dos componentes bias e precisão separadamente (Teste-t e Qui-quadrado em validação ou gráficos de controle na rotina), mas esta abordagem é inconveniente, pois valores muito pequenos de um dos componentes não compensam a falha do outro componente. O uso de intervalos de confiança e/ou Erro Total em validação de métodos tem sido discutido ou proposto na literatura e é uma abordagem estatística e cientificamente fundamentada que incorpora a expressão da soma da veracidade (ou bias) e da precisão (ou desvio padrão). Este método utiliza ainda o uso do Perfil de Exatidão baseado em intervalos de tolerância (ou intervalos de predição) para decidir se um modelo de calibração dará resultados de qualidade. No presente trabalho aplicamos e avaliamos o uso do Conceito do Erro Total, dos perfis de Exatidão e dos Índices de Exatidão na validação de um ELISA para determinação do teor de ovoalbumina em vacinas contra febre amarela, utilizando o intervalo de concentrações preconizado na literatura específica de 33 a 167% da concentração alvo (5µg/ml) e um intervalo controle bem abaixo desta faixa (0,33 a 2,5%). O conceito do Erro Total apresentou sensibilidade satisfatória e foi capaz de identificar o desempenho insatisfatório da técnica nas concentrações controle fora da faixa de quantificação. A pré-validação do ELISA para detecção do teor de ovoalbumina demonstrou que o ensaio apresenta satisfatórias - exatidão, repetitividade, precisão intermediária e veracidade, é um método confiável e conveniente para avaliar o teor de ovalbumina.