Efeito do dietilditiocarbamato de sódio isolado e em combinação com benzonidazol sobre Trypanosoma cruzi: nova estratégia para otimização da quimioterapia antiparasitária

Abstract

INTRODUÇÃO: Estima-se que a doença de Chagas afete aproximadamente 8 milhões de pessoas, levando a óbito cerca de 12.000 indivíduos por ano, principalmente, nas Américas do Sul e Central. Apesar da grande demanda, no Brasil apenas o benzonidazol está disponível para o tratamento da doença de Chagas, o qual apresenta eficácia limitada e consideráveis efeitos colaterais. Além disso, há registro de cepas do Trypanosoma cruzi que apresentam resistência natural ou selecionada pelo uso prolongado desse fármaco. Assim, torna-se de fundamental importância o desenvolvimento de fármacos mais efetivos ou combinações que apresentem efeitos sinergísticos. Uma abordagem promissora está baseada no uso de substâncias que inibam as enzimas reguladoras do metabolismo redox parasitário, como a tripanotiona redutase e a superóxido dismutase ferro (SOD-Fe), por serem encontradas seletivamente nos tripanossomatídeos. A atividade da SOD tem um papel relevante em parasitoses, atuando como um potente antioxidante que protege os parasitos do ataque da resposta imune do hospedeiro, a qual envolve a produção de espécies químicas oxidantes e modula a ação de diversos antiparasitários. OBJETIVO: Desta forma, neste trabalho objetivamos avaliar o papel do antagonista da atividade superóxido dismutase, o dietilditiocarbamato de sódio (DETC) e do seu precursor o dissulfiram (DF), em presença ou ausência do benzonidazol (Bz). MATERIAL E MÉTODOS: Para avaliação da ação tripanocida deste inibidor, isolado ou combinado, experimentos foram conduzidos com as três formas evolutivas do T. cruzi das cepas Y e Colombiana. Nos ensaios para avaliação da inibição parasitária in vitro, determinação da IC50 e da FIC da combinação, foram avaliadas concentrações na faixa de 0.6-10 μM, por 24 e 120 horas, em meio LIT completo. Para os experimentos de citotoxicidade, foram usados macrófagos murinos residentes e as concentrações do DETC e DF variaram de 1-200 μM. Posteriormente, foram avaliados os aspectos ultraestruturais, atividades enzimáticas, geração de espécies oxidantes, respiração parasitária e participação de grupamentos sulfidrilas conduzidos na ausência e presença de diferentes concentrações das substâncias isoladas ou em combinação. Ensaios in vivo, usando o modelo murino (linhagem suíça) foram realizados para avaliação da eficácia sobre as fases aguda e crônica da doença de Chagas. Nesses ensaios, avaliou-se a parasitemia, sobrevida, dosagem de enzimas marcadoras de toxicidade, análise histopatológica e desempenho locomotor. RESULTADOS: Os resultados demonstraram um efeito com inibição dependente da concentração sob a proliferação in vitro, em todas as formas evolutivas avaliadas, sendo a IC50 do Benz reduzida em 43,86% quando combinado ao DETC. Dentre as organelas observadas as mais afetadas foram as mitocôndrias e o retículo endoplasmático, as quais apresentavam dilatações acentuadas. As mitocôndrias dos parasitos apresentaram depósitos eletrondensos e redução significativa na sua função. As drogas combinadas ocasionaram diminuição da atividade da SOD-Fe e da expressão de grupamentos sulfidrilas e, consequentemente, a acentuada produção de espécies oxidantes e o aumento da peroxidação lipídica. Os resultados in vivo demostraram que o DETC em combinação com Benz foi capaz de inibir, significativamente, a parasitemia, aumentar seis vezes a sobrevida e diminuir as lesões cardíacas dos animais infectados com a cepa Y, no modelo de fase aguda. Todavia, quando estudamos a ação do DF combinado ao Bz no modelo de fase crônica e com a cepa naturalmente resistente ao Bz, a cepa Colombiana, foi possível observar uma melhora dos parâmetros bioquímicos e histológicos, mas houve menor sobrevida quando comparado ao grupo controle, porém sem diferença em relação ao desempenho locomotor. CONCLUSÕES: Assim, o presente trabalho demonstra uma nova abordagem para modulação das vias redox do T. cruzi, sendo, entretanto, requeridos novos estudos que incluam diferentes doses, vias de administração e tempos de tratamento para o desenvolvimento de uma melhor estratégia terapêutica para doença de Chagas.