Atividade in vitro e in vivo de fármacos pró-oxidantes sobre o Schistosoma mansoni

Abstract

A esquistossomose atinge no mínimo 249 milhões de pessoas no mundo (OMS, 2014) e no Brasil de 1995 para 2010 o número de casos confirmados aumentou de 441 para 47157 (MS, 2010). As drogas usadas para o tratamento da esquistossomose mansônica são a oxamniquina e o praziquantel, os quais reduziram o número de casos, porém com decorrente surgimento de resistência do helminto e efeitos colaterais graves. Diante disto, tornam-se imprescindíveis os estudos para a busca racional de novos fármacos. Uma nova abordagem quimioterápica para esta patologia é a associação de drogas antiparasitárias com índice de seletividade elevado. A combinação de dietilditiocarbamato de sódio (DETC) e curcumina (Curc.), testada por nosso grupo contra Plasmodium falciparum, apresentou esses índices com valores bem promissores de 21,55 (DETC) e 10161,03 (Curc.). Diante dessa premissa, decidimos avaliá-la contra o Schistosoma mansoni in vitro, uma vez que ambos parasitos detoxificam o heme através da formação de cristais de hemozoína. Além disso, analisamos a atividade esquistossomicida da associação do artemeter (Arte.) e DETC, pois constatamos sinergismo com a associação da artemisinina e esse carbamato em S. masoni in vitro. Quando analisada a combinação do DETC e Curc., essa apresentou sinergismo, como na condição de 30 OM (DETC) e 40 OM (Curc.) com 100 % de morte dos vermes. Para as avaliações da combinação de DETC com Arte., foi possível observar que essa potencializou o efeito das drogas, especialmente na condição de 50 OM (DETC) e 333 OM (Arte.), ocorrendo também 100 % de morte dos vermes. Em seguida, avaliamos a produção de espécies reativas pelo aumento de fluorescência emitida por carboxi-H2DCFDA oxidada. Todas as condições apresentaram marcação fluorescente, exceto para a Curc. e, co-incubado com Ditiotreitol, a associação Curc.-DETC apresentou alta fluorescência. Posteriormente foi testado o potencial das drogas em inibir a cristalização de hemina em β- hematina, que foi evidenciada para a Curc. e o DETC em concentrações elevadas e, em associação, para todas as condições. Diante desses resultados, avaliamos as alterações ultraestruturais com o uso da microscopia eletrônica de transmissão (MET), detectando desestruturação/perda tegumentar e do tecido muscular, além de degradação do epitélio intestinal, nas condições das drogas associadas (DETC e Curc.) e do DETC a 30 OM. Com esses resultados, verificamos que as combinações são tóxicas para esplenócitos, nas condições utilizadas para avaliar o efeito helminticida in vitro. Em seguida, observamos que não houve diferença significativa da atividade de transaminases séricas em camundongos sadios tratados com a associação da Curc. e DETC, quando comparado ao controle com o solvente, bem como uma redução significativa do número de ovos obtidos em camundongos infectados e tratados com 40 mg/kg/dia (Curc.) e 50 mg/kg/dia (DETC), porém, não ocorrendo o mesmo para o número de vermes. Desta forma, estudos tanto sobre os mecanismos de ação dos fármacos em questão, quanto os seus efeitos esquistossomicidas, são válidos na tentativa de sanar esse problema de saúde pública