Caracterização fenotípica e genotípica de Mycobacterium tuberculosis da família Beijing do tipo ancestral e moderno

Abstract

A tuberculose ainda é um problema de saúde pública global, principalmente em países em desenvolvimento, onde a doença é negligenciada e associada à pobreza, co-infecção com HIV e resistência aos antibióticos. A infecção é causada principalmente pelo agente etiológico Mycobacterium tuberculosis (Mtb),e em especial a linhagem Beijing se destaca entre as outras linhagens do complexo Mtb, por geralmente estar relacionada com a presença de mais fatores de virulência e mecanismo de multirresistência à drogas. O principal objetivo deste trabalho foi caracterizar geneticamente e fenotipicamente a Mtb Beijing, em oito isolados esporádicos circulantes no Brasil e em dezoito isolados de regiões com maior prevalência, como Moçambique e Rússia. Para a genotipagem foram utilizadas inicialmente, ferramentas moleculares tradicionais como o RFLP, Spoligotyping e MIRU-VNTR. Com a intenção de aprofundar a classificação da sublinhagem ancestral e moderna, avaliamos inserções de IS6110 inverso na região NTF, regiões de deleção (RDs 105,142,150 e 181) e SNPs nos genes mutT2 e mutT4. Ainda, sequenciamos o genoma de 11 isolados visando avaliar a presença e conservação de genes associados à virulência Do ponto de vista fenotípico, foram realizados experimentos de infecção em macrófagos THP-1 e em camundongo C5BL/6, para avaliar a virulência das linhagens ancestral e moderna. A genotipagem demonstrou que a maioria dos isolados Mtb Beijing do Brasil pertenciam a sublinhagem ancestral e que os isolados de Moçambique e da Rússia eram em sua maioria modernos. A avaliação da infecção in vitro e in vivo, evidenciou que independente da região geográfica, os isolados Mtb Beijing modernos são mais virulentos que a sublinhagem ancestral. Coerentemente, o sequenciamento genômico revelou um menor número de genes associados à virulência em isolados ancestrais. Dessa forma, este trabalho demonstrou pela primeira vez fatores que podem estar contribuindo para o sucesso da família Beijing dentro do complexo Mtb. Este trabalho abre a perspectiva de futuramente avaliar o posicionamento filogenético desses isolados em relação à coleção mundial da família Beijing