Avaliação do ELISA in-house e da Reação em Cadeia da Polimerase como ferramentas diagnósticas para Trypanosoma caninum em cães domésticos

Abstract

Trypanosoma caninum é uma espécie recentemente descrita em cães no Brasil. Ferramentas acuradas para o diagnóstico desse agente ainda não foram plenamente estabelecidas e a possibilidade de confusão com o diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC) tem sido uma preocupação. O objetivo deste estudo foi avaliar testes sorológicos (ELISA-Tc, EIE-LVC® e DPP®) e testes baseados na amplificação do DNA (PCR-18S rDNA e kDNA) e sequenciamento para investigação diagnóstica da infecção por T. caninum e Leishmania. chagasi em 229 cães. Os cães foram triados durante um senso sorológico para leishmaniose no Rio de Janeiro, Brasil, no ano de 2009, ocasião de coleta das amostras biológicas. A cultura parasitológica de fragmentos de pele foi empregada como padrão de referência e os resultados obtidos foram reunidos em dois artigos científicos. Dos 229 cães estudados, T. caninum foi isolado de 11 animais, exclusivamente na pele e L. chagasi de 12 animais, em sítios de pele e/ou lesão cutânea. No teste de ELISA-Tc, 39,3% (n=90) cães foram reatores, incluindo 8 dos 11 cães com isolamento de T. caninum e 11 dos 12 com isolamento de L. chagasi, conferindo ao ELISA-Tc índices de sensibilidade e especificidade de 71,72% e 62,39%, respectivamente. No teste DPP, 5,6% (n=13) cães foram reatores, incluindo 11 dos 12 cães com isolamento de L. chagasi, apresentando sensibilidade de 95% e especificidade de 99,08%. Já no EIE-LVC, 8,3% (n=19) cães foram reatores, incluindo todos os 12 cães com isolamento de L. chagasi. Esse teste apresentou 100% de sensibilidade e 96,77% de especificidade. Através da PCR-18S rDNA, 15,28% (n=35) cães foram positivos, dos quais 25 apresentaram padrão de amplificação similar à T. caninum e 10 padrão similar à L. chagasi. Esse resultado foi confirmado pelo sequenciamento Quando utilizamos a PCR-kDNA, detectamos 14 cães positivos (10 animais positivos pelo 18S rDNA, 12 com isolamento de L. chagasi e mais 2 animais que apresentaram resultados negativos na cultura e na PCR-18S rDNA). Nossos resultados mostraram que a cultura parasitológica não detectou todos os cães infectados por T. caninum e L. chagasi, considerando os dados sorológicos e moleculares aplicados neste estudo. Com relação aos testes sorológicos, verificamos que o ELISA-Tc apresentou acurácia moderada, diferente dos testes de DPP e EIE-LVC que apresentaram índices de sensibilidade e especificidade elevados. Um dado interessante foi verificar que não houve reatividade cruzada ao DPP e ao EIE-LVC dos cães parasitologicamente positivos para T. caninum. Os resultados da PCR, pelo 18S rDNA não tiveram concordância com os resultados sorológicos, demonstrando que o diagnóstico acurado da infecção por T. caninum não pode ser dado ainda, por uma única ferramenta. De um modo geral, nossos resultados mostraram mais uma vez que T. caninum e L. chagasi coexistem em cães no Rio de Janeiro; que o ELISA-Tc pode constituir uma ferramenta auxiliar para o diagnóstico de T. caninum e apontam a utilidade da PCR-18S rDNA para o rastreamento molecular, sobretudo em áreas de sobreposição com L. chagasi