Pesquisa de IgG anti-formas epimastigotas fixadas de Trypanosoma cruzi por citometria de fluxo: otimização e análise de desempenho, aplicada ao diagnóstico e monitoração de cura da Doença de chagas

Abstract

Um dos grandes desafios enfrentados por pesquisadores no campo da propedêutica sorológica complementar tem sido a busca d a melhor preparação antigênica para as aplicações no âmbito do imunodiagnóstico de doenças infecto-parasitárias visando maior sensibilidade e especificidade dos testes. Uma nova metodologia de pesquisa de IgG anti-formas e pimastigotas fixadas (FC-AFEA-IgG), baseada na citometria de fluxo, tem se mostrado um instrumento alternativo para o diagnóstico e monitoração de cura da infecção crônica por Trypanosoma cruzi. Dando continuidade a esta investigação, o objetivo desse trabalho foi otimizar e avaliar os índice s de desempenho da FC- AFEA-IgG, principalmente no que se refere ao diagnóstico sorológico da doença de Chagas. Neste estudo, foram selecionados um total de 255 indivíduos, dentre eles, 52 pacientes adultos cronicamente infectados por T. cruzi (CH) e 41 indivíduos não-infectados (NI) para avaliação da FC-AFEA-IgG no diagnóstico. Para a avaliação na monitoração de cura pós-tratamento etiológico da doença de Chagas, foram analisadas 24 amo stras de soro de pacientes tratados curados (TC) e 17 amostras de soro de pacientes tratados, porém, não-curados (TNC). Adicionalmente, foram testadas 121 amostras de soro de indivíduos portadores de outras doenças infecto-parasitárias: esquistossomose mansônica, malária, toxoplasmose, HLTV, HIV, Hepatite B, Hepatite C, sífilis, leishmanioses visceral e tegumentar. Todas as amostras foram submetidas a testes de sorologia convencional específicos para o diagnóstico da doença de Chagas. Os resultados de otimização demonstraram que alterações metodológicas relacionadas com a utilização de anticorpo secundário anti-Fc-IgG, a ampliação da faixa de diluição das amostras-teste (1:16 a 1:32.768) e eliminação de 'debris’ pela utilização do corante vital azul de Evans para marcação dos parasitos, permitiram melhor d esempenho da FC- AFEA-IgG modificada quando comparada com a original. E m síntese, nossos resultados demonstraram que, empregando a diluição do soro 1:2.048 e o valor de 60% de PPFP como ponto de corte, o estudo da reatividade sorológica de IgG anti-formas epimastigotas fixadas de T. cruzi aplica-se ao diagnóstico e à monitoração de cura pós-tratamento etiológico da doença de Chagas com índices de sensibilidade e especificidade de 97,1% e 95, 4%, respectivamente.