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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/20834
Tipo de documento
TeseDireito Autoral
Acesso aberto
Objetivos de Desenvolvimento Sustentável
03 Saúde e Bem-EstarColeções
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CARACTERIZAÇÃO DE POTENCIAIS ALVOS MOLECULARES E TESTE DE FÁRMACOS CANDIDATOS AO TRATAMENTO DA DOENÇA DE CHAGAS EXPERIMENTAL
Ferraz, Marcela Lencine | Data do documento:
2009
Autor(es)
Orientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Resumo
No ano de comemoração do centenário de descoberta da doença de Chagas ainda são muitos os desafios e as dificuldades na busca de novas alternativas eficazes para o tratamento da doença. O objetivo deste trabalho foi caracterizar potenciais alvos moleculares e testar fármacos candidatos para o tratamento da doença de Chagas. Como alvos foram analisadas três enzimas: a Tiol Transferase (Tc52), a Glutamato Desidrogenase (TcGluDH) e a Aldo/ceto Reduta se (TcAKR), selecionadas a partir de prévias análises de genômica e proteômica em cepas de Trypanosoma cruzi sensíveis e resistentes ao Benzonidazol. Como potenciais fármacos, foram escolhidos três medicamentos: o Tamoxifeno, a Amiodarona e o Ravuconazol, testados in vitro e in vivo, nas fases aguda e crônica da doença de Chagas experimental. Para os testes in vivo os fármacos foram utilizados isoladamente ou em combinação. Adicionalmente, foi avaliado o efeito cooperativo do sistema imune na atividade dos inibidores da biossíntese de ergosterol, Posaconazol e Ravuconazol. Os resultados mostraram que apenas a TcGluDH foi diferencialmente expressa, apresentando uma menor expressão da proteína e do respectivo mRNA nas cepas resistentes ao Benzonidazol em comparação com as cepas sensíveis. Para TcAKR não foi possível completar a caracterização, mas observamos um aumento no nível de mRNA nas cepas resistentes analisadas quando comparada com as sensíveis. Não houve correlação entre a expressão da Tc52 e o fenótipo de resistência a fármacos do T. cruzi. Nos testes de fármacos, as melhores resultados foram obtidos com a associação Ravuconazol e Amiodarona: 60% de cura e 90% de sobrevivência dos camundongos infectados e tratados nas fase s aguda e crônica. A associação entre Amiodarona e Benzonidazol não gerou efeito sinérgico ou aditivo na cura da doença de Chagas experimental. O Tamoxifeno apesar de ter se mostrado potente nos testes in vitro foi inativo in vivo. Com relação a avaliação da cooperação do sistema imune na atividade do Posaconazol, nossos resultados mostraram uma nítida influência dos diferentes tipos de linfócitos na atividade desse fármaco assim como para o Benzonidazol. Provavelmente, esse efeito foi devido a ação preferencial desses fármacos sobre diferentes estágios do parasito, em cooperação com diferentes elementos do sistema imune. A utilização de camundongos knockout mostrou que a ausência de Interferon-reduziu a atividade do Ravuconazol e Benzonidazol. O presente trabalho abre perspectivas para serem exploradas.
Resumo em Inglês
In the year of commemoration of the centenary of Chagas disease discovery, the challenges and difficulties in the search of new efficien t alternatives for the treatment of the illness still remain. The objectives of this work were to characterize potential molecular targets and test drugs candidates for the treatment of the Chagas disease. Three potential targets had been selected: Thiol Transferase (Tc5 2), Glutamate Dehidrogenase (TcGluDH) and the Aldo/Keto Reductase (TcAKR). They we re pointed out by genomic and proteomic analysis of Benznidazole susceptible and resistant Trypanosoma cruzi strains. As potential drugs, three medicines had been chosen: Ta moxifen (TAM), Amiodarone (AMIO) and Ravuconazole (RAVU). They were tested in vitro and in vivo , in the acute and chronic phases of the experimental Chagas disease. For the tests in vivo the drugs had been used separately or in combination. Additionally, we evaluate the cooperative effect of the host immune system in the activity of inhibitors of the biosynthesis of ergosterol, Posaconazole (POS) and RAVU. The results show that only the TcGluDH was differentially expressed, presenting a reduction in the prot ein expression and mRNA levels in resistant strains to Benznidazole. Although a complete characteri zation of TcAKR could not be reached, we observe difference in the mRNA levels in the strains analyzed. However no correlation between the expression of the Tc52 and resist ance phenotype was observed. In the tests of drugs, the highest activities were observed fo r RAVU and AMIO associ ation: 60% of cure and 90% of survival of the infected and trea ted mice in the chronic phase. The association between AMIO and BZ generate neither synerg ic or additive effect in the cure of the experimental Chagas disease. Although TAM presen ted high activity in vitro it was inactive in vivo . In regard to cooperation effect of the host immune system a clear influence of the lymphocytes were observed on the activity of POS and BZ. Our results show that the absence of different lymphocyt es activities has dist inct effects on the efficacy of POS and BZ in th e treatment of murine acute T. cruzi infection. Probably, this effect had the preferred stock of these drugs on different parasite stages, in cooperation with different elements of the immune syst em. The use of knockout mice showed that the absence of gamma interferon reduced the R AVU and BZ activities. The present work considers new alternatives for the Chagas di sease chemotherapy, and opens perspectives to be further explored.
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