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ESTABELECIMENTO DE UMA PLATAFORMA DE TESTE DE COMPOSTOS EM SCHISTOSOMA MANSONI UTILIZANDO INIBIDORES DE FATORES DE MODIFICAÇÃO EPIGENÉTICA
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Abstract in Portuguese
A esquistossomose é a segunda doença parasitária mais prevalente no mundo. Atualmente, seu tratamento depende de uma única droga, o Praziquantel; e devido a identificação de parasitos resistentes, o desenvolvimento de novas drogas é necessário. No Brasil, essa doença afeta cerca de 25 milhões de pessoas e não há uma plataforma de teste de novas drogas estabelecida. Com o intuito de estabelecer uma plataforma de testes de drogas anti-Schistosoma mansoni, foram padronizadas 3 metodologias para triagem de drogas em esquistossômulos, o ensaio de fluorescência utilizando alamarBlue®, a análise quantitativa de lactato e o ensaio visual por coloração com iodeto de propídio. A análise quantitativa de lactato e o ensaio visual por coloração com iodeto de propídio demonstraram ser mais sensíveis e confiáveis que o ensaio de fluorescência com alamarBlue® e foram escolhidos para a triagem de drogas em esquistossômulos. Para a triagem de drogas em vermes adultos foi utilizado o software para análise de movimento WormAssay. Compostos desenvolvidos para fatores de modificação epigenética por colaboradores do consórcio AParaDDisE foram utilizados para a validação da plataforma. Após a triagem de drogas em esquistossômulos, os compostos ativos foram selecionados para a determinação do IC50 e índice de seletividade. Nesse trabalho um total de 252 compostos foram testados e 132 foram ativos em S. mansoni, desse, 72 foram ativos em esquistossômulose vermes adultos, 50 foram ativos somente em vermes adultos e 8 foram ativos somente em esquistossômulos. Dentre os compostos ativos foi possível determinar o índice de seletividade de 29 inibidores. Os compostos JQ1, MC3031, MC2141, MC290 8, MC3668, MC2705, MC3073, C-646 e SPV-106 foram considerados potenciais drogas para o tratamento da esquistossomose, uma vez que foram ativos nas duas fases do parasito e exibirem alto índice de seletividade. Esses resultados mostram que os fatores de modificações epigenéticas podem apresentar importante papel na viabilidade e sobrevivência do S. mansoni, confirmando o potencial dessas enzimas como alvo de drogas.
Abstract
Schistosomiasis is the second most prevalent parasit ic disease in the world. Currently, the treatment of this disease rely on a single drug, Praziquantel; and due to the identification of resistant parasites, the d evelopment of new drugs is urged. In Brazil this disease affects around 25 million people and an anti- Schistosoma mansoni drug screening platform is inexistent. In order to s olve this problem, 3 in vitro methodologies were standardized for schistosomula, t he alamarBlue® fluorescence assay, lactate quantitative analysis and visual assay using propidium iodide staining. The lactate quantitative analysis an d visual assay using propidium iodide staining proved to be more sensitive and reli able than the alamarBlue® fluorescence assay, thus were chosen for the schistosomula drug s creening. For the drug screening in adult worms, the movement analysis software WormAssay was standardized and used. Compounds developed for epige netic modification factors by collaborators of A-ParaDDisE consortium were tested fo r platform validation. After the drug screening in schistosomula, the active compo unds were analyzed for its IC50 and selectivity index determination. In this wo rk, a total of 252 compounds were tested and 132 compounds were active in S. mansoni , among those, 73 were active in schistosomula and adult worms, 50 were active in a dult worms, only, and 8 were active in schistosomula only. Among the active compo unds, it was possible to determine the selectivity index of 29 inhibitors. T he compounds JQ1, MC3031, MC2141, MC2908, MC3668, MC2705, MC3073, C-646 e SPV- 106 were considered potential drugs for schistosomiasis therapy conside ring that they were active in both Schistosoma stages and exhibited a high selectivity index and/or low IC50. The results showed that epigenetic modifications factors play an important role in parasite viability and survival, confirming the potential of these enzymes as drug targets.
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