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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/23688
CINÉTICA DE CARGA VIRAL EM COMPONENTES DO SANGUE DE PACIENTES CRONICAMENTE INFECTADOS PELO VÍRUS DA HEPATITE C, ANTES E DURANTE TERAPIA TRIPLA.
Fradico, Jordana Rodrigues Barbosa | Date Issued:
2017
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Abstract in Portuguese
A hepatite C é um grave problema de saúde pública mun
dial, causada pelo vírus da
hepatite C (VHC). Apesar dos hepatócitos serem o alvo
principal do VHC, o vírus
pode ainda interagir com monócitos, linfócitos, célu
las endoteliais, eritrócitos e
plaquetas. Neste contexto o presente estudo buscou a
valiar a cinética viral em
componentes do sangue de pacientes sintomáticos cron
icamente infectados pelo
VHC, antes e durante a terapia tripla (interferon-pe
guilado/ribavirina e inibidor de
protease).
Com esta finalidade, os seguintes objetivos específi
cos foram propostos
para a população avaliada: otimizar uma metodologia
in house para adaptação do kit
Abbott RealTime HCV
®
(Abbott Molecular, EUA) para a execução da quantifica
ção
da carga viral de VHC em soro, sangue total, eritrócit
os, plaquetas e leucócitos;
quantificar a carga viral de VHC nesses componentes sa
nguíneos; associar e
correlacionar a carga viral de VHC com dados laborato
riais dos pacientes antes e
durante terapia tripla. Os objetivos foram cumprido
s pela execução da metodologia
de transcrição reversa seguida de PCR em tempo real (
RT-qPCR) utilizando o kit
Abbott RealTime HCV
®
. Dessa maneira avaliou-se amostras de componentes
sanguíneos de 20 pacientes com diagnóstico confirmado
de hepatite C crônica,
infectados pelo VHC genótipo 1. Esta população de estu
do apresentou perfis
epidemiológicos e clínico-laboratoriais semelhantes
aos descritos na literatura.
Obteve-se otimização do kit
Abbott RealTime HCV
®
para quantificação do RNA-VHC
em condições de pesquisa e aumentou-se em 4 vezes o
número de reações por kit,
resultando em uma economia financeira considerável.
A análise da quantificação da
carga viral foi realizada por quatro variáveis, sendo
elas: tempo de tratamento,
componente sanguíneo, níveis da carga viral e desfech
o clínico. Em todas,
observou-se que o soro foi o componente com maiores
níveis de carga viral e as
hemácias com menor nível. Durante a terapia tripla,
houve redução dos níveis de
cargas virais em todos os componentes sanguíneos anal
isados. Esta redução só
não foi observada na 24ª semana de tratamento, quand
o houve aumento das cargas
virais, quando comparado com a quarta semana. Estes ní
veis apresentaram queda
na 48ª semana sem, no entanto, atingir carga nula no
soro, sangue total, hemácias e
plaquetas. Positividade que não foi capaz de alterar o
desfecho clínico dos
pacientes, que se mantiveram apresentando resposta v
irológica sustentada (RVS). A
concretização deste estudo demonstrou que pacientes
infectados pelo VHC
cronicamente apresentaram altas cargas de VHC associa
das aos componentes
sanguíneos. O tratamento medicamentoso da infecção a
presentou-se eficiente e
efetivo, provocando uma alteração na cinética de in
teração do vírus com os
componentes sanguíneos. O aumento das cargas virais n
a 24ª semana é um
indicativo de que esta é uma semana crítica na terap
ia tripla, que merece maior
atenção dos profissionais de saúde. A constatação de
baixas cargas virais no soro,
sangue total, hemácias e plaquetas na 48ª semana da t
erapia foi um resultado
surpreendente do estudo, visto que 85,7% dos pacient
es obtiveram RVS. Sugere-se
a continuidade de estudos que aprofundem pontos impo
rtantes evidenciados por
este trabalho. Os resultados obtidos proporcionaram
um entendimento maior da
fisiopatologia do processo e da interação do VHC com
os componentes do sangue.
Abstract
ABSTRACT
Hepatitis C is a serious global public health proble
m, caused by the hepatitis C virus
(HCV). Although hepatocytes are the major target of HCV,
the virus may still interact
with monocytes, lymphocytes, endothelial cells, eryt
hrocytes, and platelets. In this
context, the present study sought to evaluate viral
kinetics in blood components of
patients chronically infected with HCV before and dur
ing triple therapy (pegylated
interferon/ ribavirin and protease inhibitor). The
following specific objectives were
proposed: to optimize an in-house methodology for th
e adaptation of the
Abbott
RealTime HCV
®
kit (Abbott Molecular, USA) for the quantification of
HCV viral load in
serum, whole blood, erythrocytes, platelets and leuk
ocytes; to quantify the HCV load
in these blood components; to associate and correla
te HCV load with laboratorial
data of patients before and during triple therapy. T
he objectives were met by the
implementation of the reverse transcription methodo
logy followed by real-time PCR
(RT-qPCR) using the
Abbott RealTime HCV
®
kit. Using this approach, peripheral
blood samples from 20 patients with a confirmed diagn
osis of chronic hepatitis C,
infected by HCV genotype 1, were analyzed. This study
population presented
epidemiological and clinical-laboratorial profiles s
imilar to those described in the
literature.
Abbott RealTime HCV
®
kit was optimized for HCV RNA quantification in
research conditions and increased the number of rea
ctions per kit in 4 times. The
analysis of the viral load was performed by four var
iables: treatment time, blood
component, viral load levels and clinical outcome.
In all of them, it was observed that
serum was the component with the highest levels of vir
al load and the red cells with
the lowest level. During triple therapy, there was a r
eduction in levels of viral loads in
all blood components analyzed. This reduction was no
t observed at 24th week of
treatment, when viral loads increased when compared t
o the fourth week. At 48th
week, the viral load levels were decreased without, ho
wever, reaching zero load in
serum, whole blood, red blood cells and platelets. T
his persistent positivity was not
able to change the clinical outcome of the patients,
who maintained a sustained
virological response (SVR). The achievement of this st
udy demonstrated that HCV
chronically infected patients present high HCV loads
associated with blood
components. The drug treatment of the infection was e
fficient and effective, causing
a change in the kinetics of virus interaction in the
blood components. The increase in
viral load at 24th week is indicative that this is a
critical week in triple therapy, which
deserves more attention from health professionals.
Low viral load in serum, whole
blood, red blood cells and platelets at 48th week o
f therapy was a surprising result of
the study, since 85.7% of the patients obtained SVR.
This finding suggests that additional studies could im
prove the understanding of the
mechanisms responsible for the blood components-HCV
interaction during the viral
infection.
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