Expressão e caracterização de proteína de envelope gp140 do HIV pelo vírus da Febre Amarela 17D

Abstract

A vacina contra a febre amarela (FA) é constituída pela partícula infecciosa do vírus FA da cepa 17D e atenuada por meio de diversas passagens em células de tecidos e hospedeiros diferentes. A vacina é altamente eficaz e segura, pois induz a uma resposta robusta e duradoura no hospedeiro e apresenta uma baixa taxa de efeitos adversos em vacinados sendo então considerada uma das vacinas mais bem desenvolvidas propostas até hoje. Somando-se a estas características, a cepa 17D tem sido visto como um vetor promissor para a expressão de proteínas heterólogas. Nosso laboratório utiliza uma estratégia única que consiste na inserção de cassetes heterólogos na região intergênica E/NS1 do genoma viral de FA. O Vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (HIV-1) é um dos vírus responsáveis pela maior pandemia vista até hoje. Diversos esforços têm sido feitos para o controle da doença, porém o tratamento ainda é feito através da terapia antirretroviral (HAART). Entretanto ainda é possível que haja falha na terapia, o que justifica a necessidade do desenvolvimento de uma vacina. Neste trabalho utilizamos a plataforma de inserção de cassetes heterólogos na região intergênica E/NS1 para expressar as proteínas do envelope, gp41, gp120 e, a associação destas, a gp 140 do HIV-1. A clonagem plasmidial inicial para a obtenção de cDNA viral recombinante para a forma nativa ou trimérica da gp140 foi inviável. Entretanto, conseguimos vírus FA recombinantes para gp 120 e gp 41, que apresentaram grande instabilidade genética Adicionalmente, a detecção de um painel de anticorpos monoclonais específicos para epítopos conformacionais da gp120 detectaram este antígeno em células Vero indicando que a proteína expressa pelo vírus FA adota alguma conformação semelhante à forma nativa. Estes resultados substanciam os estudos de aprimoramento do vetor FA 17D para expressão de antígenos de patógenos humanos visando seu uso para o desenvolvimento de novas vacinas