Please use this identifier to cite or link to this item: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/23876
Title: Ubiquitinoma quantitativo durante a metaciclogênese de Trypanosoma cruzi
Advisor: Marchini, Fabricio Klerynton
Krieger, Marco Aurélio
Members of the board: Dominguez, Alejandro Correa
Goldenberg, Samuel
Authors: Lima, Carla Vanessa de Paula
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.
Abstract: O Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da Doença de Chagas, alterna entre formas morfológica e fisiologicamente distintas durante seu ciclo de vida. Devido à ausência de mecanismos de controle transcricionais, a regulação da expressão gênica neste parasita acontece principalmente a nível pós-transcricional. Esta regulação pode acontecer a nível protéico através da modulação da quantidade, atividade e localização sub-celular de proteínas estágio-específicas. Abordagens baseadas em proteômica quantitativa em larga escala são extremamente úteis para estudar alterações globais na expressão de proteínas em T. cruzi durante sua diferenciação, uma vez que muitos genes que não apresentam variações no nível de mRNA acabam por apresentar expressão diferencial nos níveis proteicos. A metodologia de marcação isotópica estável por aminoácidos (SILAC) gera uma quantificação protéica de alta acurácia e têm sido aplicada com sucesso em análises comparativas de diversos tipos celulares. No presente trabalho, desenvolvemos um meio quimicamente definido para o cultivo de T. cruzi, o que possibilitou a aplicação da metodologia SILAC para realizar a quantificação de proteínas em larga escala ao longo da diferenciação do parasita para formas infectivas (metaciclogênese). Além disso, usando o meio definido para cultivo de T. cruzi, foi possível realizar uma análise metabolômica baseada em espectrometria de massas para medir o consumo e a produção de componentes no meio pelo parasita. No presente trabalho, mais de 3000 proteínas foram identificadas e quantificadas com sucesso em diferentes etapas da diferenciação do parasita, tornando possível a identificação de quase 500 proteínas reguladas durante o processo. Também foram identificados 138 sítios de ubiquitinação em 107 proteínas, com algumas delas sendo reguladas durante o processo de diferenciação.
Abstract: Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, alternate between distinct morphological and functional forms during its life cycle. In T. cruzi due to the lack of transcriptional control mechanisms, gene expression is mainly post-transcriptionally regulated. This regulation may occur at protein level by modulation of amount, activity, and sub-cellular localization of stage-specific proteins. Quantitative proteomics-based approaches are extremely useful to study global protein expression changes in T. cruzi during its differentiation, once many genes showing no variation at total mRNA level, still may present differential expression at protein level. The stable isotope labeling by amino acids (SILAC) method yields highly accurate protein quantification and has been successfully applied to perform comparative analysis of biological systems. In this work we developed a chemically defined medium for T. cruzi growth, which allows the use of SILAC methodology to perform high accuracy large-scale protein quantification from initial points of this protozoan differentiation to its infective forms. Besides, using defined media for T. cruzi cultivation we were able to perform mass spectrometry-based metabolomics to measure consumption and production of medium components by the parasite. In the present work, more than 3 000 proteins were successfully identified and quantified at different stages of parasites differentiation, making possible to identify almost 500 regulated proteins during the process. We also identified 138 ubiquitination sites in 107 proteins, with some regulations during the differentiation process.
Keywords: Chagas Disease
Proteomics
Cell Differentiation
Parasitology
keywords: Trypanosoma cruzi
DeCS: Doença de Chagas
Proteômica
Diferenciação Celular
Parasitologia
Issue Date: 2014
Publisher: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas.
Citation: LIMA, Carla Vanessa de Paula. Ubiquitinoma quantitativo durante a metaciclogênese de Trypanosoma cruzi. 2014. 165 f. Tese (Doutorado em Biociências e Biotecnologia) - Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas, 2014, Curitiba, 2014.
Date of defense: 2014
Place of defense: Curitiba/PR
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas
Program: Programa de Pós-Graduação em Biociências e Biotecnologia
Copyright: open access
Appears in Collections:PR - ICC - Teses de Doutorado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Tese_Carla_Limaok.pdf5.93 MBAdobe PDFView/Open


FacebookTwitterDeliciousLinkedInGoogle BookmarksBibTex Format mendeley Endnote DiggMySpace

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.