Padronização da técnica de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real para quantificação dos vírus quiméricos FA17D/DEN1, 2, 3, 4 candidatos a vacina tetravalente contra a Dengue

Abstract

A dengue é hoje uma das mais importantes doenças infecciosas do mundo em termos de morbidade e mortalidade. A doença é endêmica em mais de 60 países e estima-se que o vírus dengue (DENV) cause anualmente de 50-100 milhões de casos de doença febril aguda, principalmente nas regiões tropicais e subtropicais do mundo. Para prevenção da dengue, atualmente só existe o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti, portanto, é de extrema importância que se desenvolva uma vacina eficaz contra esta doença. A grande dificuldade no desenvolvimento desta vacina está relacionada ao fato do DENV possuir quatro sorotipos (DENV-1, 2, 3 e 4), e uma infecção secundária por um sorotipo heterólogo pode elevar as chances de agravamento do quadro clínico do paciente. Por este motivo, a vacina deve ser tetravalente e igualmente eficaz na proteção contra os quatro sorotipos. Com este objetivo, uma vacina recombinante tetravalente contra a dengue está em desenvolvimento em Bio-Manguinhos. Para o desenvolvimento e produção de vacinas virais em geral, é necessário que se faça o monitoramento da carga viral ao longo de todo o processo, desde a produção do antígeno, purificação, inativação, liofilização, testes pré-clínicos e clínicos e, após o licenciamento do produto, o processo de farmacovigilância contínuo. Atualmente, o padrão ouro para o monitoramento da carga viral realizado em Bio-Manguinhos é o ensaio de titulação por placa de lise, que leva de sete a dez dias para se obter o resultado A padronização da técnica de RT-PCR em tempo real (RT-qPCR) permitirá que este monitoramento seja realizado em poucas horas. Desta forma, o nosso objetivo foi desenvolver um protocolo de RT-qPCR que permitisse quantificar com maior rapidez e eficácia os vírus quiméricos candidatos à vacina contra dengue, em todas as etapas que necessitem do monitoramento da carga viral durante o processo de desenvolvimento e produção da vacina. Embora a metodologia utilizada não seja capaz de identificar a capacidade infecciosa das partículas virais, foi possível estabelecer um fator de correção entre número de cópias do genoma com partículas infecciosas.