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Title: Padronização da técnica de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real para quantificação dos vírus quiméricos FA17D/DEN1, 2, 3, 4 candidatos a vacina tetravalente contra a Dengue
Advisor: Lima, Sheila Maria Barbosa de
Campos, Elena Cristina Caride Siqueira
Authors: Coelho, Aline Martins Cardoso
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: A dengue é hoje uma das mais importantes doenças infecciosas do mundo em termos de morbidade e mortalidade. A doença é endêmica em mais de 60 países e estima-se que o vírus dengue (DENV) cause anualmente de 50-100 milhões de casos de doença febril aguda, principalmente nas regiões tropicais e subtropicais do mundo. Para prevenção da dengue, atualmente só existe o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti, portanto, é de extrema importância que se desenvolva uma vacina eficaz contra esta doença. A grande dificuldade no desenvolvimento desta vacina está relacionada ao fato do DENV possuir quatro sorotipos (DENV-1, 2, 3 e 4), e uma infecção secundária por um sorotipo heterólogo pode elevar as chances de agravamento do quadro clínico do paciente. Por este motivo, a vacina deve ser tetravalente e igualmente eficaz na proteção contra os quatro sorotipos. Com este objetivo, uma vacina recombinante tetravalente contra a dengue está em desenvolvimento em Bio-Manguinhos. Para o desenvolvimento e produção de vacinas virais em geral, é necessário que se faça o monitoramento da carga viral ao longo de todo o processo, desde a produção do antígeno, purificação, inativação, liofilização, testes pré-clínicos e clínicos e, após o licenciamento do produto, o processo de farmacovigilância contínuo. Atualmente, o padrão ouro para o monitoramento da carga viral realizado em Bio-Manguinhos é o ensaio de titulação por placa de lise, que leva de sete a dez dias para se obter o resultado A padronização da técnica de RT-PCR em tempo real (RT-qPCR) permitirá que este monitoramento seja realizado em poucas horas. Desta forma, o nosso objetivo foi desenvolver um protocolo de RT-qPCR que permitisse quantificar com maior rapidez e eficácia os vírus quiméricos candidatos à vacina contra dengue, em todas as etapas que necessitem do monitoramento da carga viral durante o processo de desenvolvimento e produção da vacina. Embora a metodologia utilizada não seja capaz de identificar a capacidade infecciosa das partículas virais, foi possível estabelecer um fator de correção entre número de cópias do genoma com partículas infecciosas.
Abstract: Dengue is today one of the most important infectious diseases in the world in terms of morbidity and mortality. The disease is endemic in more than 60 countries and it\2019s estimated that dengue virus (DENV) causes annually around 50-100 milions of acute fever cases, mainly in the tropical and subtropical regions of the world. Curently the only way to prevent Dengue, tis to the combat the mosquito vector Aedes aegypti. Therefore, it\2019s extremely important to develop an effective vaccine against this disease. The main difficulty in the development of the vaccine is related to the fact that the Dengue virus has four different serotypes (DENV-1, 2, 3 e 4), and a secondary infection by a heterologous serotype may increase the chances of worsening the patient's condition. On this ground, the vaccine should be tetravalent and equally effective in protecting against all four serotypes. To this end, a tetravalent recombinant vaccine against dengue is under development in Bio\2013Manguinhos. The development and the production of viral vaccines needs the monitoring of the viral load in different stages, from the antigen production, purification, inactivation, lyophilization, preclinical and clinical trials and, after the product is licensed a continued pharmacovigilance is required Currently the golden standard method to monitor the viral load in Bio-Manguinhos is the plaque assay, which takes about seven to ten days to get the results. The standardization of the real-time RT-PCR (RT-qPCR), will allow that this monitoring is carried out in a few hours. In this context, we developed a protocol of RT-qPCR which enables to quantify faster and effectiveness the chimeric viruses candidates to the vaccine against dengue, throughout all the steps listed above. Despite the fact that the used methodology isn\2019t capable of identifying the infeccious capability of the virus particles, it was possible to stablish a correction factor between the number of genome copies with the infeccious particles.
keywords: Reação em Cadeia da Polimerse via Transcriptase Reversa
Vírus da Dengue
Vacinas contra a Dengue
Issue Date: 2013
Citation: COELHO, Aline Martins Cardoso. Padronização da técnica de reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa em tempo real para quantificação dos vírus quiméricos FA17D/DEN1, 2, 3, 4 candidatos a vacina tetravalente contra a Dengue. 2013. 116 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia de Imunobiológicos)-Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2013.
Date of defense: 2013
Place of defense: Rio de Janeiro
Department: Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz
Program: Programa de Pós-Graduação em Tecnologia de Imunobiológicos
Copyright: open access
Appears in Collections:Biomanguinhos - Dissertações de Mestrado

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