Avaliação das metodologias não-radioativas EDU e FASCIA na proliferação de linfócitos em pacientes suspeitos de imunodeficiência primária

Abstract

As imunodeficiências primárias (IDPs) são doenças genéticas raras onde deve ser desenvolvido um fluxo de trabalho de diagnóstico clínico e laboratorial gradual e complexo. Devido à sua diversidade, a avaliação da resposta dos linfócitos do paciente frente a estimulação mitogênica é uma das ferramentas propostas durante a triagem clínica para as imunodeficiências primárias. O ensaio padrão-ouro para esta avaliação é a incorporação de [3H]-timidina após a estimulação com mitógenos ou antígeno-específico de linfócitos. Algumas tecnologias que utilizam citometria de fluxo têm sido propostas como alternativas não-radioativas para a avaliação linfoproliferativa. Até hoje, apenas a metodologia FASCIA foi avaliada no contexto de IDP e foi considerada útil para pacientes com imunodeficiência combinada grave (SCID). Neste estudo, comparamos duas metodologias diferentes baseadas em citometria de fluxo, FASCIA e EdU, com a incorporação de [3H]-timidina em pacientes suspeitos e confirmados para IDP. Nossos resultados demonstraram uma melhor correlação entre a incorporação de EdU e [3H]-timidina quando comparada à metodologia FASCIA. Além disso, a proliferação de linfócitos utilizando o estímulo com PHA apresentou alta sensibilidade e especificidade para a identificação de pacientes WAS com um potencial ponto de corte de 26% de células EdU+ para disfunções funcionais de linfócitos em pacientes IDP. Além disso, pacientes suspeitos de IDP com alto escore IDR mostraram uma diminuição significativa na porcentagem de células em proliferação EdU+, muito semelhante àquelas encontradas em pacientes de WAS. Conclui-se que a metodologia de EdU, após estimulação com PHA, é indicada para a avaliação não-radioativa da proliferação de linfócitos no contexto de IDPs graves.