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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/25913
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DNA SEQUENCING OF 13 CYTOKINE GENE FRAGMENTS OF AOTUS INFULATUS AND SAIMIRI SCIUREUS, TWO NON-HUMAN PRIMATE MODELS FOR MALARIA
Author
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa em Malária. Centro de Pesquisa em Malária e Treinamento. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Universidade Federal do Pará. Laboratório de Imunologia. Belém, PA, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa em Malária. Centro de Pesquisa em Malária e Treinamento. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do pará. Laboratório de Polimorfismos de DNA. Belém, PA, Brasil.
Universidade Federal do pará. Laboratório de Polimorfismos de DNA. Belém, PA, Brasil.
Fiocruz Cecal. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Centro Nacional de Primatas. Belém, PA, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Biologia Molecular do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Biologia Molecular do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Biologia Molecular do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa em Malária. Centro de Pesquisa em Malária e Treinamento. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa em Malária. Centro de Pesquisa em Malária e Treinamento. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa em Malária. Centro de Pesquisa em Malária e Treinamento. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do pará. Laboratório de Polimorfismos de DNA. Belém, PA, Brasil.
Universidade Federal do pará. Laboratório de Polimorfismos de DNA. Belém, PA, Brasil.
Fiocruz Cecal. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Centro Nacional de Primatas. Belém, PA, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Biologia Molecular do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Biologia Molecular do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Biologia Molecular do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa em Malária. Centro de Pesquisa em Malária e Treinamento. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa em Malária. Centro de Pesquisa em Malária e Treinamento. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract
Aotus and Saimiri are non-human primate models recommended by the World Health Organization for experimental studies in malaria, especially for vaccine pre-clinical trials. However, research using these primates is hindered by the lack of specific reagents to evaluate immune responses to infection or vaccination. As a step toward developing molecular tools for cytokine expression studies in these species, primer pairs for 18 cytokine gene fragments were designed based on human DNA sequences and used to amplify the corresponding genes in Aotus infulatus and Saimiri sciureus genomic DNA samples. IFNγ, TNFα, LTA, IL2, IL3, IL4, IL5, IL6, IL10, IL12, IL13, CSF2 and TGFβ2 gene fragments were amplified and sequenced. Primer pairs for IL8, IL17, IL18, IL27 and MIF failed to generate amplification products. When compared to the available corresponding human and non-human primate sequences, most--except IL3 and IL4--showed identity degrees above 90%. Small variations in sequence can help to explain the failure to amplify certain genes or the amplification only at lower annealing temperatures as compared to human DNA samples for several primer pairs. The sequences made available provide the basis for designing molecular tools such as primers for real time PCR specific for A. infulatus and/or S. sciureus. The nucleotide sequences reported in this paper have been submitted to the GenBank nucleotide sequence database and have been assigned accession numbers DQ985386 to DQ985389, DQ989356 to DQ989369, FJ89020 to FJ89024, and FJ89029.
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