Produção de IgY anti - Campylobacter jejuni para pesquisa de co-proantígenos de Macaca mulatta e Macaca fascicularis

Abstract

A campilobacteriose é uma das principais doenças entéricas de origem alimentar do mundo. É capaz de ocorrer, não só no homem, mas também em primatas não humanos de cativeiro. Sendo, desta forma, importante no monitoramento sanitário destas colônias. Causada por bactérias do gênero Campylobacter, seu diagnóstico é realizado pela detecção do micro-organismo nas fezes, pelo método padrão ouro: o cultivo microbiológico, incluindo o isolamento, prova de Gram e testes bioquímicos. Todo o processo leva de 5 a 7 dias. Outra forma de diagnóstico são os kits de detecção antigênica por ensaio imunoenzimático que são de fácil realização e o resultado determinado em poucas horas. Entretanto, estes kits utilizam anticorpos produzidos em mamíferos e têm sua eficiência questionada por conta da acurácia reduzida. Sendo assim, esse estudo teve por principal objetivo, produzir Imunoglobulina Y (IgY) como anticorpo primário extraído de gemas de ovos de galinhas imunizadas com Campylobacter jejuni para sua aplicação em um teste imunoenzimático in house, para pesquisa de coproantigenos de Campylobacter sp. em amostras de primatas não humanos do gênero Macaca. Sua realização seguiu a política dos 3Rs, já que desenvolve uma técnica onde são utilizados um número menor de animais para produção de IgY, quando comparados aos testes tradicionais, além de promover produção maior com procedimentos menos invasivos Para isso galinhas poedeiras foram imunizadas com antígeno bruto de C. jejuni, foram colhidos ovos para isolamento, caracterização de IgY, purificação e utilização como anticorpo primário no ELISA in house frente a amostras de fezes e lavado da ampola retal dos primatas avaliados. Após purificação, a IgY demonstrou perfil eletroforético compatível com o descrito para molécula, apresentou reconhecimento frente ao antígeno imunizante por meio de western-blot e ELISA e foi capaz de detectar bactérias do gênero Campylobacter spp. nas amostras fecais do gênero Macaca. O teste de ELISA construído utilizando a IgY como anticorpo primário, demonstrou reconhecimento frente ao antígeno imunizante nas amostras analisadas.