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CARACTERIZAÇÃO TRANSCRIPTÔMICA E PROTEÔMICA DA GLÂNDULA DE FEROMÔNIO DE LUTZOMYIA LONGIPALPIS (DIPTERA:PSYCHODIDAE)
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Abstract in Portuguese
Lutzomyia longipalpis é o principal vetor de Leishmania infantum, que é o agente etiológico da Leishmaniose Visceral Americana (LVA). Considerado um complexo de espécies crípticas, Lutzomyia longipalpis utiliza diferentes feromônios terpenóides (produzidos por machos) que atuam como atraentes para as fêmeas, e ao mesmo tempo como feromônios de agregação para os machos. A pesar do conhecimento dos principais componentes químicos das misturas de feromônios nada se sabe sobre os genes ou as moléculas diretamente envolvidas na biossíntese ou da sua regulação. Tais moléculas podem representar alvos alternativos de estratégias de controle das populações desses insetos vetores. Neste sentido através de uma abordagem descritiva foi realizado o estudo das sequencias de ESTs assim como também a caracterização subproteômica da glândula de feromônio. Com as análises dos transcritos e através de pesquisas nas bases de dados públicos, um grupo de moléculas potencialmente envolvidas na produção de precursores de terpenóides foi identificado no quarto segmento abdominal (segmento que contém a glândula de feromônio). Tais moléculas incluem transcritos de possíveis enzimas da via do acido mevalônico e sequências associadas à preniltransferases. Motivados por estes resultados também foi realizada uma análise subproteômica da glândula de feromônio combinando cromatografia liquida SDS-PAGE acoplada com espectrometria de massas LC-MS/MS e analises dos dados. Tendo em conta que a anotação funcional das sequências do genoma de Lutzomyia longipalpis ainda é escassa, nós projetamos um fluxo de trabalho alternativo para o mapeamento proteômico da glândula As sequências MS/MS foram pesquisadas contra dois bancos de dados personalizados, utilizando três motores de busca: MASCOT, OMSSA e ProLuCid. Com esta abordagem, foi possível obter as evidências de expressão das enzimas identificadas pela análise de transcritos e ainda aumentar o espaço de busca por similaridade e ampliar as identificações das proteínas da glândula de feromônio de L. longipalpis.
Abstract
Lutzomyia longipalpis is the main vector of Leishmania infantum, the etiological agent of American visceral leishmaniasis (AVL). Considered a complex of cryptic species, Lutzomyia longipalpis use male-produced terpenoid pheromones to attract females for mating and males for aggregation. Despite the chemical identification of the main pheromone blend components, there is no information regarding genes and proteins directly involved in the biosynthetic process. These molecules may represent alternative targets for insect population control. In this respect, we studied the pheromone gland using a descriptive approach including a ESTs sequiencing and a subproteomic analysis. Through blast searches of public databases, a group of transcripts encoding proteins potentially involved in the production of terpenoid precursors were identified in the 4th abdominal tergite, the segment containing the pheromone gland. Such molecules include transcripts potentially related to the mevalonate pathway enzymes as well as prenyltransferases Motivated by these results we performed a subproteomic analysis of this tissue combining SDS-PAGE liquid chromatography in line with tandem mass spectrometry LC-MS/MS and data mining. Considering that the functional annotation of genome sequences of Lutzomyia longipalpis is relatively scarce, we designed an alternative workflow searching MS/MS data against two customized databases using three search engines: Mascot, OMSSA, and ProLuCid. Through this approach it was possible to obtain evidence of expressions for those molecules found in the transcriptome and also broadens the search records to allow a confident identification of L. longipalpis proteins by similarity analysis.
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