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Title: Avaliação dos efeitos do inibidor de fosfodiesterase-5 sobre os mecanismos regulatórios da neuroinflamação em modelo de esclerose múltipla em camundongos C57BL/6
Other Titles: Evaluation of the phosphodiesterase-5 inhibitor effects on regulatory mechanisms of neuroinflammation in animal model of multiple sclerosis
Advisor: Peixoto, Christina Alves
Members of the board: Peixoto, Christina Alves
Oliveira, Sheilla Andrade de
Costa, Belmira Lara Andrade da
Authors: Silva, Eduardo Pereira Duarte da
Coadvisor: Nunes, Ana Karolina
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract: A Esclerose Múltipla (EM) é doença do sistema nervoso central caracterizada por desmielinização. Dentre os modelos animais usados para estudá-la, destaca-se o de Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE). O tratamento da EM tem sido feito com fármacos imunomoduladores. Porém, devido a problemas na eficácia, novas alternativas terapêuticas têm sido propostas, como a utilização dos Inibidores de Fosfodiesterase-5, tais como o Sildenafil. Portanto, o presente estudo objetivou avaliar os efeitos do Sildenafil sobre os mecanismos regulatórios da neuroinflamação em modelo de EAE em camundongos C57BL/6. Para tanto, 37 animais foram divididos nos seguintes grupos experimentais: (a) CONTROLE; (b) EAE - foram induzidos à EAE; (c) SILD - foram induzidos à EAE e tratados com 25mg/kg de Sildenafil. No 21° dia, a medula espinhal foi removida para análises das vias inflamatória e apoptótica. Os resultados mostraram que o grupo EAE apresentou perda de peso e aumento progressivo do escore clínico. Por sua vez, o Sildenafil preveniu a piora desses parâmetros. Além disso, no grupo EAE houve intensa infiltração de células T CD4+ e aumento na produção de citocinas. Por sua vez, o Sildenafil diminuiu o número de células infiltrantes, modificou seu fenótipo e reduziu citocinas. Animais com EAE apresentaram elevada expressão de AMPK (forma não ativa), p-NF-κBp65, p-IκBα e p-MAPK p38, além de altos níveis de NO, os quais diminuíram após uso do Sildenafil. Muitas células TUNEL+ foram vistas no grupo EAE, as quais diminuíram após uso do Sildenafil. Finalmente, o grupo EAE apresentou alta expressão de GFAP, Iba-1, IκBα, NF-κBp65, Caspase-8, -3 e TNF-α, Caspase-9, Citocromo C, FADD e Bax, e diminuição de MBP e Bcl-2. Por outro lado, o Sildenafil inibiu a neuroinflamação, a apoptose pela via extrínseca e intrínseca e promoveu remielinização. Portanto, o Sildenafil apresenta potencial terapêutico na EM, mas outros estudos são ainda necessários para melhor compreensão do seu mecanismo de ação.
Abstract: Multiple Sclerosis (MS) is a disease of the Central Nervous System characterized by demyelination. Among the animal models used to study it, there is Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE). Treatment of MS has been done with immunomodulatory drugs. However, due to low/medium and null efficacy, new therapeutic approaches have been proposed, such as the use of Phosphodiesterase-5 Inhibitors, as Sildenafil. Therefore, the aim of the present study is to evaluate the effects of Sildenafil on regulatory mechanisms of neuroinflammation in EAE. 37 C57BL/6 were used and divided into the following groups: (A) CONTROL; (b) EAE – they were induced to EAE; (c) SILD – EAE mice treated with 25mg/kg of Sildenafil. On the 21st day, the spinal cord was removed for analysis of the inflammatory and apoptotic pathways. Results showed that EAE mice presented weight loss and progressive increase in the clinical score. However, Sildenafil prevented these parameters from worsening. Besides, EAE mice had intense CD4+ T cell infiltration and cytokine production, whereas Sildenafil diminished the number of infiltrating cells, modified their phenotype and reduced cytokines. EAE mice presented decreased levels of p-AMPK and high levels of AMPK (inactive form), p-NF-κBp65, p-IκBα and p-MAPK p38 and NO, which decreased and increased (p-AMPK) after treatment with Sildenafil. Many TUNEL+ cells were observed in EAE mice, which declined after use of Sildenafil. Moreover, EAE mice displayed increased levels of GFAP, Iba-1, IκBα, NF-κBp65, Caspase-8, -3, TNF-α, FADD, Caspase-9, Cytochrome C and Bax, and decrease in MBP and Bcl-2. Nonetheless, Sildenafil inhibited neuroinflammation, the extrinsic and intrisinc pathways of apoptosis and promoted remyelination. Thus, Sildenafil has therapeutic potential to treat MS, but further studies need to be performed in order to better understand its mechanisms of action.
Keywords: Multiple Sclerosis
Experimental Autoimmune Encephalomyelitis
Sildenafil Citrate
Inflammation
Apoptosis
Spinal Cord
C57BL/6 mice
keywords: Esclerose Múltipla
Encefalomielite Autoimune Experimental
Citrato de Sildenafila
Inflamação
Apoptose
Medula Espinal
Camundongos C57BL/6
DeCS: Esclerose Múltipla
Encefalomielite Autoimune Experimental/quimioterapia
Medula Espinal/efeitos de drogas
Medula Espinal/patologia
Anti-Inflamatórios/uso terapêutico
Camundongos
Inibidores da Fosfodiesterase 5/farmacologia
Inibidores da Fosfodiesterase 5/uso terapêutico
Camundongos Endogâmicos C57BL
Descoberta de Drogas/métodos
Avaliação Pré-Clínica de Medicamentos
Modelos Animais de Doenças
Proteínas Quinases Ativadas por AMP/metabolismo
NF-kappa B/metabolismo
GMP Cíclico/metabolismo
Issue Date: 2018
Citation: SILVA, Eduardo Pereira Duarte. Avaliação dos efeitos do inibidor de fosfodiesterase-5 sobre os mecanismos regulatórios da neuroinflamação em modelo de esclerose múltipla em camundongos C57BL/6. 2018. Dissertação (Mestrado acadêmico em Biociências e Biotecnologia em Saúde) – Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2018.
Date of defense: 2018-02-23
Place of defense: Recife/PE
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães.
Program: Programa de Pós-Graduação em Biociências e Biotecnologia em Saúde
Copyright: restricted access
Appears in Collections:PE - IAM - PPBBS - Dissertações de Mestrado

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