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Title: Caracterização fenotípica e funcional de subpopulações de linfócitos t reguladores (TREG) Na reação tipo 2 (ENL) da hanseníase
Advisor: Sarno, Euzenir Nunes
Esquenazi, Danuza de Almeida
Authors: Castro, Katherine Kelda Gomes de
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: O Eritema Nodoso Leproso (ENL) é uma manifestação aguda e sistêmica, que ocorre de forma súbita, podendo ser grave e levar pacientes de hanseníase ao óbito. O episódio reacional é observado em cerca da metade dos pacientes multibacilares (MB), principalmente na forma lepromatosa polar (LL) e sua gênese pode ocorrer em qualquer momento do tratamento poliquimioterápico, inclusive antecedendo o mesmo. Incapacidades físicas associadas ao ENL são fonte de extremo sofrimento e retirada do mercado de trabalho de grande parte dos pacientes. No ENL ocorre progressão da resposta imune celular para um cenário reativo e ainda pouco compreendido. Assim, esse trabalho se propôs a caracterizar fenotípica e funcionalmente os linfócitos Treg CD4+ e CD8+ periféricos, tanto ex vivo, quanto em resposta ao M. leprae (ML), de 12 pacientes com ENL, cujos dados foram comparados com 8 pacientes LL e 10 voluntários sadios (VS) de área endêmica para a hanseníase, todos moradores do Rio de Janeiro. A frequência dessas células e sua atividade funcional foram avaliadas através da análise ex vivo da expressão de CTLA-4 e da determinação da frequência in vitro de células produtoras de TGF-\03B2 e IL-10, por citometria de fluxo multiparamétrica Ademais, a produção de citocinas em sobrenadante (SN) de culturas de células mononucleares periféricas (PBMC) frente ao ML, através de ensaio imunoenzimático (ELISA). Uma redução significativa das células Treg CD4+ ex vivo foi observada nos pacientes com ENL (p<0,001), além do envolvimento restrito de CTLA-4 em suprimir resposta ao ML em todos os grupos. A análise in vitro também demonstrou a redução significativa (p<0,0001) das Treg CD4+ no grupo ENL, com inalteração de suas frequências mesmo após estímulo com ML. A avaliação da atividade funcional in vitro revelou que as Treg CD4+ produtoras de TGF-\03B2 estão significantemente reduzidas nos pacientes com ENL em relação ao grupo LL (p<0,05), enquanto as Treg CD4+/IL-10+ não diferiram entre os grupos. De acordo com o estudo, as Treg CD8+ não estão envolvidas na gênese do ENL. Por fim, o grupo ENL apresentou níveis significativamente aumentados na produção de IL-6 por PBMC em comparação aos outros grupos, tanto em culturas não estimuladas (NE), quanto em resposta ao ML (p<0,05). O trabalho revelou ainda níveis mais elevados de produção de IL-17, IL-23 e IFN-\03B3 em PBMC no grupo ENL em comparação ao outro grupo LL, embora sem significância. Os dados obtidos sugerem uma mudança transitória na regulação da resposta imune mantida por células Treg CD4+ no ENL, como observado na forma LL, tornando o microambiente permissivo para a instalação do processo reacional.
Abstract: Erythema Nodosum Leprosum (ENL) is an acute and systemic manifestation, which occurs suddenly, can be severe and lead leprosy patients to death. Reactional episodes are observed among the half of multibacillary (MB) patients, mainly into the polar lepromatous (LL) form, beginning at any time of the multidrug therapy, and even before the treatment. Physical disabilities associated to ENL are the source of extreme suffering and absence from work in most of cases. ENL occurs in progression of the cellular immune response associated with a reactive and still poorly understood scenario. Thus, this work aimed to characterize phenotypic and functionally Treg cells CD4+ and CD8+, ex vivo and in response to M. leprae (ML), from 12 ENL patients, which were compared to 8 LL and 10 healthy volunteers (VS) from leprosy endemic areas, all residents in the city of Rio de Janeiro. The functional activity and frequencies of these cells were evaluated by ex vivo analysis of CTLA-4 expression and the in vitro frequency of TGF-\03B2 and IL-10 producing cells, through multiparametric flow cytometry In addition, the production of cytokines in supernatant (SN) from peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures was investigated against ML antigens by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Ex vivo significant reduction of Treg CD4+ frequency was observed to ENL patients (p<0,001), and low implication of CTLA-4 in suppressing response was noted in all groups. In vitro analysis also demonstrated decrease of Treg CD4+ in the ENL group (p<0,0001), without change of the frequencies, even after stimulation with ML. In vitro functional activity evaluation revealed that the frequency of Treg CD4+ producing TGF-\03B2 were significantly reduced among ENL patients compared to LL (p<0,05) and Treg CD4+/ IL-10+ did not differ significantly between groups. According to the study, Treg CD8+ are not implicated in the genesis of ENL. Finally, the ENL group had significant increased IL-6 levels production by PBMC compared to other groups, in non-stimulated (NE) cultures and in response to ML (p<0,05). The study also showed increase levels of IFN-\03B3, IL-17 and IL-23 in PBMC from ENL group in comparison to LL, although not significant. These data suggest a transient change in the regulation of the immune response maintained by Treg CD4+ in ENL, making the microenvironment permissive for the installation of the reactional process.
keywords: Linfócitos T
Eritema Nodoso
Hanseníase Virchowiana
Issue Date: 2018
Citation: CASTRO, Katherine Kelda Gomes de. Caracterização fenotípica e funcional de subpopulações de linfócitos t reguladores (TREG) na reação tipo 2 (ENL) da hanseníase. 2018. 93 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Parasitária)-Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2018.
Date of defense: 2018
Place of defense: Rio de Janeiro
Department: Instituto Oswaldo Cruz
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz
Program: Programa de Pós-Graduação em Biologia Parasitária
Copyright: open access
Appears in Collections:IOC - PGBP - Dissertações de Mestrado

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