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Title: Estudo dos marcadores de exaustão no baço de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum /
Advisor: Cupolillo, Elisa
Morgado, Fernanda Nazaré
Authors: Souza, Tainã Luís de
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: Na leishmaniose visceral canina (LVC), o baço é um dos principais órgãos afetados e a desorganização da microarquitetura esplênica tem sido associada à progressão da doença, redução da expressão de citocinas e quimiocinas e falha no controle da carga parasitária, sendo este perfil compatível com a exaustão celular. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão in situ dos marcadores de exaustão e sua relação com a desorganização da microarquitetura esplênica e carga parasitária. Para tal, 41 cães naturalmente infectados com Leishmania infantum foram submetidos à quantificação da carga parasitária por PCR quantitativo do alvo ssrRNA em tecido esplênico. Além disso, foi feita a avaliação histopatológica a partir de cortes de baço corados com hematoxilina e eosina com o objetivo de avaliar o grau de desorganização da polpa branca esplênica (PBE). Os animais foram agrupados de acordo com a organização da PBE e carga parasitária como: 1- organizado/baixa carga parasitária (OB, n=10); 2- desorganizado/baixa carga parasitária (DB, n=22); 3- desorganizado/alta carga parasitária (DA, n=8). Células CD4, CD8, IFN-\F067, IL-10, TIM-3 e CTLA-4 foram detectadas por imuno-histoquímica e as células apoptóticas pela técnica de TUNEL A desorganização da PBE ocorreu juntamente com a redução dos folículos linfoides/mm2, células CD4 e agravamento da doença. IFN-\F067 e células CTLA-4 foram detectadas nos cães OB havendo redução de acordo com o aumento da desorganização e carga parasitária. TIM-3 foi altamente expresso e similar entre os grupos. Apoptose foi detectada mesmo em cães organizados, aumentando em cães DB e reduzindo em DA. Houve correlações negativas entre TIM-3 e CTLA-4, negativas entre IFN-\F067 e células apoptóticas, e positivas entre CTLA-4 e células apoptóticas. Células B TIM-3+ foram detectadas por imunofluorescência em todos os grupos, não havendo diferença entre estes. A expressão gênica de PD-1, PD-L1, PD-L2 e LAG-3 foi identificada, onde a expressão foi menor nos grupos que apresentaram maior desorganização e carga parasitária no baço, sendo significativa esta diferença em PD-L1 e LAG-3. O conjunto de resultados indica que a exaustão em células T deve ocorrer nos estágios iniciais da infecção, uma vez que os animais OB apresentaram células TIM-3+, CTLA-4+, PD-1+, PD-L1+, PD-L2+ e LAG-3+. A apoptose é o mecanismo envolvido na redução de folículos linfoides, células CD4, CTLA-4 e IFN-\F067. O presente estudo demonstra uma associação entre marcadores de exaustão, apoptose e desorganização esplênica, redução de linfócitos CD4, falha no controle da carga parasitária e piora da enfermidade.
Abstract: In canine visceral leishmaniasis (LVC), the spleen is one of the main organs affected and the disorganization of the splenic microarchitecture has been associated with disease progression, reduced expression of cytokines and chemokines, and failure to control parasitic load, being this profile compatible with cellular exhaustion. The objective of this study was to evaluate the in situ expression of the markers of exhaustion and its relation with the disorganization of the splenic microarchitecture and parasitic load. To that end, 41 dogs naturally infected with Leishmania infantum were submitted to quantification of the parasite load by quantitative PCR of the ssrRNA target in splenic tissue. In addition, histopathological evaluation was performed from spleen sections stained with hematoxylin and eosin with the objective of evaluating the degree of disorganization of the splenic white pulp (SWP). The animals were grouped according to the organization of the SWP and parasitic load as: 1- organized/low parasitic load (OL, n=10); 2- disorganized/low parasitic load (DL, n=22); 3- disorganized/high parasitic load (DH, n=8). CD4, CD8, IFN-\F067, IL-10, TIM-3 and CTLA-4 cells were detected by immunohistochemistry and apoptotic cells by the TUNEL technique The disorganization of SWP occurred along with the reduction of lymphoid follicles/mm2, CD4 cells and worsening of the disease. IFN-\F067 and CTLA-4 cells were detected in the OL dogs with reduction according to the increase of the disorganization and parasitic load. TIM-3 was highly expressed and similar between the groups. Apoptosis was detected even in organized dogs, increasing in DL dogs and reducing in DH. TIM-3+ B cells were detected by immunofluorescence in all groups, with no difference between them. The gene expression of PD-1, PD-L1, PD-L2 and LAG-3 was identified, the expression was lower in the groups that presented greater disorganization and parasitic load in the spleen, being significant this difference in PD-L1 and LAG-3. The set of results indicates that T cell exhaustion should occur in the early stages of infection, since OL animals had TIM-3+, CTLA-4+, PD-1+, PD-L1+, PD-L2+ and LAG-3+ cells. Apoptosis is the mechanism involved in the reduction of lymphoid follicles, CD4, CTLA-4 and IFN-\F067 cells. The present study demonstrates an association between exhaustion markers, apoptosis and splenic disorganization, reduction of CD4 lymphocytes, failure to control parasitic load and worsening of the disease.
keywords: Leishmaniose Visceral
Cães
Baço
Leishmania infantum
DeCS: Leishmaniose Visceral
Baço
Cães
Leishmania infantum
Issue Date: 2018
Citation: SOUZA, Tainã Luís de. Estudo dos marcadores de exaustão no baço de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum. 2018. 101 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Parasitária)-Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2018.
Date of defense: 2018
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Pós-Graduação em Biologia Parasitária
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz
Program: Programa de Pós-Graduação em Biologia Parasitária
Copyright: restricted access
Appears in Collections:IOC - PGBP - Dissertações de Mestrado

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