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Title: Caracterização de novos modelos celulares (in vitro) para testes de drogas com potencial antiviral contra o vírus zika
Other Titles: Characterization of new cellular models (in vitro) for tests of drugs with antiviral potential against the zika virus
Advisor: França, Rafael Freitas de Oliveira
Members of the board: França, Rafael Freitas de Oliveira
Hernandes, Valéria Pereira
Araújo, Antonio Roberto Lucena de
Authors: Lima, Morganna Costa
Coadvisor: Morais, Clarice Neuenschwander Lins de
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract: O vírus Zika (ZIKV) tornou-se um problema de saúde pública mundial não somente pelo aumento de sua capacidade de disseminação e de infecção em humanos, mas também (e principalmente) devido a sua associação com a Síndrome de Guillain-Barré (SGB) e a Síndrome Congênita do Zika (SCZ). Por ser neurotrópico, o mesmo é capaz de infectar e destruir células de linhagem neuronal além de evadir da resposta imune hospedeira por meio de sua interação com fatores indispensáveis no estabelecimento do estado antiviral. A inexistência de tratamento específico, associado a um número restrito de modelos celulares de infecção já caracterizados, ressalta a importância deste trabalho, o qual tem como objetivo caracterizar três modelos celulares de infecção com o ZIKV (SH-SY5Y, THP-1 e HUVECs), além de testar a atividade antiviral do imunomodulador P-MAPA. Desta forma, as células foram infectadas com ZIKV (MOI 0,5 e 1,0), com posterior quantificação da carga viral e marcação da proteína E do vírus por RT-qPCR e ensaio de imunofluorescência, respectivamente. Uma vez que o modelo de infecção foi estabelecido, as células foram tratadas com P-MAPA seguido da análise de carga viral e morte celular. O ZIKV foi capaz de infectar todas as linhagens celulares utilizadas neste estudo e de induzir a produção de citocinas pró-inflamatórias. Além disso, o vírus promoveu o remodelamento do citoesqueleto de actina em HUVECs nos estágios iniciais da infecção. Quando tratadas com o P-MAPA, as células THP-1 apresentaram maior carga viral quando comparadas ao controle positivo (CP). Quanto às células SH-SY5Y e HUVECs, não foram observadas diferenças nas análises realizadas entre os grupos CP versus P-MAPA. Assim, conclui-se que as três linhas celulares são um modelo adequado para o estudo da patogênese da infecção com ZIKV e que o P-MAPA não é uma boa alternativa no tratamento da infecção.
Abstract: The Zika virus (ZIKV) has become a worldwide public health problem as a result of its capacity of dissemination and specially, due to its association with Guillain-Barré Syndrome (GBS) and Congenital Zika Syndrome (CZS). Since ZIKV is able to infect and destroy neuronal cells, and to evade the host immune response by interacting with factors responsible antiviral activation, and also, given the lack of specific treatment for ZIKV infection, associated with a few available well-established cellular models of infection, studies to address these questions are necessary. Here, we characterized three cellular models of ZIKV infection employing distinct human cell lines (SH- SY5Y, THP-1 and HUVECs). Additionally, we evaluated the potential antiviral activity P-MAPA, a well characterized fungus extract with immunomodulatory activity. For this, cells were infected with ZIKV (MOI 0.5 and 1.0), followed by viral load quantification and labeling of virus E protein by RT-qPCR and immunofluorescence assay, respectively. In addition, the cells were treated with P-MAPA followed by analysis of viral load and cell death assays. We observed that ZIKV was able to infect all cell lines and to induce the production of proinflammatory cytokines. In addition, the virus promoted actin cytoskeletal remodeling in HUVECs at the early stages of infection. Following P-MAPA treatment, THP-1 cells showed an increase in viral load, suggesting a protective effect of P-MAPA, the same effect was observed on SH-SY5Y and HUVECs cells. Here, our data supports the conclusion that all the three cell-lines are a suitable model for ZIKV infection useful to provide a better understanding about its pathogenesis. On the other hand, our results suggest that P-MAPA has no specific antiviral effect against ZIKV, however a slight protective effect on cell death was observed after treatment with P-MAPA.
Keywords: Zika Virus
Zika Virus Infection
Imunomodulators
keywords: Zika Vírus
Infecção pelo Zika Vírus
Imunomoduladores
DeCS: Zika Vírus
Infecção pelo Zika Vírus
Fatores Imunológicos
Células Cultivadas
Suscetibilidade a Doenças
Técnicas In Vitro/métodos
Proteínas Fúngicas/uso terapêutico
Antivirais/farmacocinética
Avaliação Pré-Clínica de Medicamentos
Relação Dose-Resposta a Droga
Humanos
Animais
Camundongos
Issue Date: 2018
Citation: LIMA, Morganna Costa. Caracterização de novos modelos celulares (in vitro) para testes de drogas com potencial antiviral contra o vírus zika. 2018. Dissertação (Mestrado em Biociências e Biotecnologia em Saúde) – Instituto Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2018.
Date of defense: 2018-02-28
Place of defense: Recife/PE
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães.
Program: Programa de Pós-Graduação em Biociências e Biotecnologia em Saúde
Copyright: restricted access
Appears in Collections:PE - IAM - PPBBS - Dissertações de Mestrado

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