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ASPECTOS DA FAUNA FLEBOTOMÍNEA (DIPTERA: PSYCHODIDAE) E DA INFECÇÃO POR LEISHMANIA SPP. EM CÃES DOMÉSTICOS EM UMA ÁREA DE ALTA INCIDÊNCIA DE LEISHMANIOSE TEGUMENTAR EM RIO BRANCO, ACRE
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Abstract in Portuguese
Os flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) são insetos de importância médica pelo envolvimento no ciclo zoonótico de transmissão de Leishmania aos vertebrados. O objetivo deste trabalho foi estudar os aspectos ecológicos da fauna de flebotomíneos e da infecção por Leishmania nesses insetos e em cães domésticos, em áreas ambientes rurais e urbanos do município de Rio Branco, Estado do Acre. Para o estudo da fauna de flebotomíneos foram utilizadas armadilhas de Shannon e HP luminosa por 13 meses consecutivos (Dezembro de 2014 a Janeiro de 2016). Para investigação da infecção natural por Leishmania e fonte alimentar, amostras de DNA foram extraídas de fêmeas de flebotomíneos e submetidas à reação em cadeia polimerase (PCR) utilizando os iniciadores para as regiões ITS1 e cyt b; as espécies de Leishmania e fonte alimentar foram identificadas por blast. Um total, 2.517 indivíduos foram coletados, e 43 espécies foram identificadas. Trichophoromyia auraensis (839 \2013 33,35%), Trichophoromyia ssp. (537 \2013 21,35%) e Evandromyia saulensis (187 \2013 7,43%) foram as espécies mais abundantes. A riqueza de espécies foi maior no ambiente rural (S = 41 espécies) do que no parque urbano (S = 26 espécies), o ambiente florestal (43 espécies) foi mais rico do que o peridomicílio (28 espécies). Na análise comparativa da riqueza de espécies coletadas no ambiente peridomiciliar (rural) não apresentou diferença significativa (H= 0,04; p >0,05), porém com um número maior de espécies no ambiente rural (mata) DNA de Leishmania foi sequenciado de amplificação de treze amostras e a presença confirmada de Leishmania (Vianna) braziliensis em: Trichophoromyia auraensis \2013 1, Evandromyia saulensis - 2, Evandromyia walkeri - 2, Psychodopygus llanosmartins - 1, Pintomyia nevesi - 2, Psychodopygus davisi - 1, Psychodopygus ayrozai - 1, Psathyromyia aragaoi - 1, Nyssomyia antunesi - 1, Evandromyia infraspinosa \2013 1. Apenas uma amostra de Psychodopygus ayrozai foi similar à sequência de Leishmania (Vianna) guyanensis. Na análise microscópica, cinco espécies de Evandromyia saulensis apresentaram formas flageladas no intestino posterior, sugestivas a infecção por Leishmania e a taxa de infecção foi de 2,4%. Um total de 33 fêmeas ingurgitadas foi submetido à amplificação do gene cyt b. Após o sequenciamento todas as amostras foram similares à sequência depositada no GenBank da espécie Gallus gallus. No diagnóstico da infecção canina por Leishmania foram coletadas amostras de sangue periférico de 55 animais, para análise microscópica através de esfregaços em lâminas coradas com Giemsa e por PCR avaliando uma região do ITS1. As lâminas de esfregaço do sangue periférico dos cães não apresentaram nenhuma forma sugestiva de Leshmania, contudo foi evidenciada a presença de alguns hemoparasitas. O DNA de Leishmania ssp. foi amplificado em três amostras de sangue periférico, para posterior sequenciamento e identificação da espécie. Com os dados obtidos nesse estudo foi possível ampliar o conhecimento do ciclo da LT em Rio Branco e fornecer informações acerca dos aspectos ecológicos, fonte alimentar dos flebotomíneos e ciclo de transmissão do parasita na região.
Abstract
Phlebotomines (Diptera: Psychodidae) are insects of medical importance due to their involvement in the zoonotic cycle of transmission of Leishmania to vertebrates. The objective of this work was to study the ecological aspects of sandfly fauna and Leishmania infection in these insects and in domestic dogs, in rural and urban environments of the municipality of Rio Branco, State of Acre. For the study of sandfly fauna, Shannon and HP luminous traps were used for 13 consecutive months (December 2014 to January 2016). To investigate the natural infection by Leishmania and food source, DNA samples were extracted from females of sandflies and submitted to the polymerase chain reaction (PCR) using the primers for the ITS1 and cyt b regions; Leishmania species and food source were identified by blast. A total of 2,517 individuals were collected, and 43 species were identified. Trichophoromyia auraensis (839-33.35%), Trichophoromyia ssp. (537 - 21.35%) and Evandromyia saulensis (187 - 7.43%) were the most abundant species. The species richness was higher in the rural environment (S = 41 species) than in the urban park (S = 26 species), the forest environment (43 species) was richer than the peridomicile (28 species). In the comparative analysis of the richness of species collected in the peridomiciliary (rural) environment, there was no significant difference (H = 0.04, p> 0.05), but with a larger number of species in the rural environment (forest) Leishmania DNA was sequenced with amplification of thirteen samples and the confirmed presence of Leishmania (Vianna) braziliensis in: Trichophoromyia auraensis - 1, Evandromyia saulensis - 2, Evandromyia walkeri - 2, Psychodopygus llanosmartinsi - 1, Pintomyia nevesi - 2, Psychodopygus davisi - 1, Psychodopygus ayrozai - 1, Psathyromyia aragaoi - 1, Nyssomyia antunesi - 1, Evandromyia infraspinosa - 1. Only one sample of Psychodopygus ayrozai was similar to the Leishmania (Vianna) guyanensis sequence. In the microscopic analysis, five species of Evandromyia saulensis showed flagellate forms in the posterior intestine, suggestive of Leishmania infection and the infection rate was 2.4%. A total of 33 engorged females were submitted to cyt b gene amplification. After sequencing all the samples were similar to the sequence deposited on GenBank of Gallus gallus species. In the diagnosis of canine infection by Leishmania, peripheral blood samples from 55 animals were collected for microscopic analysis by smears on Giemsa stained slides and by PCR evaluating an ITS1 region. The smear blades of the peripheral blood of the dogs did not present any form suggestive of Leshmania, however was evidenced the presence of some hemoparasites. The DNA of Leishmania ssp. was amplified in three samples of peripheral blood, for later sequencing and identification of the species. With the data obtained in this study, it was possible to increase the knowledge of the LT cycle in Rio Branco and to provide information about the ecological aspects, feeding source of sandflies and the transmission cycle of the parasite in the region.
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