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Title: Atividade de (-)-\03B1-bisabolol contra Leishmania infantum em células mononucleares de sangue periférico canino
Advisor: Calabrese, Katia da Silva
Souza, Fernando Almeida de
Authors: Souza, Luzilene Maria de
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: No Brasil, o Milteforan® é o único produto autorizado para o tratamento da leishmaniose visceral canina (LVC). Entretanto, apresenta um alto custo, longo período de tratamento e riscos de toxicidade ao animal, dessa forma, a busca por novas alternativas terapêuticas torna-se contínua. Estudos com produtos naturais vêm apresentando resultados promissores, sobretudo contra Leishmania infantum. Estudos mostram que o (-)-\03B1-bisabolol tem um efeito leishmanicida e que esse composto pode ser um bom candidato a ser integrado no painel de drogas para o tratamento das leishmanioses. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade do (-)-\03B1-bisabolol, um sesquiterpeno presente em óleos essenciais de diversas plantas, contra formas promastigotas e amastigotas intracelulares de L. infantum. Foram determinadas as concentrações inibitórias (IC) do (-)-\03B1-bisabolol contra formas promastigotas e formas amastigotas intracelulares de L. infantum por meio de contagem em câmara de Neubauer, bem como foram avaliadas as alterações ultraestruturais ocasionadas pelo tratamento, por microscopia eletrônica de transmissão (MET). A concentração citotóxica (CC) do composto em células mononucleares de sangue periférico (PBMC) canino e células DH82 Em todos os experimentos foram utilizados controles sem tratamento ou tratados com mitelfosina. O (-)-\03B1-bisabolol e a miltefosina não apresentaram toxicidade para as PBMC (CC50>1080 \03BCM). Para as células DH82 tratadas com (-)-\03B1-bisabolol a concentração citotóxica foi de 556,5 ± 1,253 \03BCM e para miltefosina foi 170,2 ± 1,268 \03BCM. O (-)-\03B1-bisabolol provocou inibição do crescimento de promastigotas com IC50 de 117,5 ± 1,291 \03BCM (24h), 35,73 ± 1,076 \03BCM (48h) e 31,02 ± 1,161 \03BCM (72h), enquanto a miltefosina apresentou IC50de 4,8±1,080 \03BCM (24h), 9,5±1,198 \03BCM (48h) e 8,6 \03BCM ± 1,253 (72h). Em relação à infecção intracelular de PBMC houve diminuição do crescimento de formas amastigotas em 50% na concentração de 34,76 ± 1,265\03BCM (24h) nas células tratadas com (-)-\03B1-bisabolol e o grupo tratado com miltefosina apresentou IC50 de 30,57 ± 1,596\03BCM. As análises ultraestruturais das promastigotas revelaram como principais alterações a vacuolização citoplasmática, inclusões lipídicas, membranas eletrondensas dispersas no citoplasma, desorganização celular e perda da morfologia estrutural do parasito. O presente estudo demonstrou a efetividade in vitro do (- )-\03B1-bisabolol contra L. infantum o que nos fornece fundamentos básicos para posteriores estudos in vivo.
Abstract: In Brazil, Milteforan® is the only authorized product for the treatment of canine visceral leishmaniasis (CVL). However, it presents high cost, long period of treatment and toxicity risks to the animal. Therefore, the search for new alternative therapeutics is constant. Studies with natural products have shown promising results, especially against Leishmania infantum. Researches show that (-)-\03B1-bisabolol has a leishmanicidal effect and this compound may be a good candidate to be integrated into the drugs panel for the leishmaniasis treatment. The objective of the present study was to evaluate the (-)-\03B1-bisabolol activity, a sesquiterpene present in essential oils of several plants, against promastigotes and intracellular amastigotes of L. infantum. Inhibitory concentrations (IC) of (-)-\03B1-bisabolol against L. infantum promastigote and intracellular amastigotes forms were determined by Neubauer method. Ultrastructural changes caused by the treatment were observed by transmission electron microscopy (TEM). The compound cytotoxicity concentrations (CC) on canine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and DH82 cells was determined In all experiments, untreated or mitelfosine-treated controls were used. (-)-\03B1-bisabolol and miltefosine showed no toxicity to PBMC (CC50> 1080 \03BCM). DH82 cells treated with (-)-\03B1-bisabolol showed cytotoxic concentration at 556.5 ± 1.253\03BCM while for miltefosine it was 170.2 ± 1.268 \03BCM. (- )-\03B1-bisabolol caused growth inhibition of promastigotes with IC50 117.5 ± 1,291 \03BCM (24 h), 35.73 ± 1,076 \03BCM (48 h) and 31.02 ± 1,161 \03BCM (72 h). Miltefosine caused growth inhibition of promastigotes with IC50 4,8 ± 1,080 \03BCM (24h), 9,5 ± 1,198 \03BCM (48h) and 8,6 ± 1,253 \03BCM (72h). Intracellular amastigotes of PBMC showed IC50 of 34.76 ± 1,265 \03BCM (24h) in cells treated with (-)-\03B1-bisabolol and the group treated with miltefosine showed IC50 of 30,57 ± 1,596 \03BCM. Main ultrastructural alterations observed in promastigote forms with (-)-\03B1- bisabolol were cytoplasmic vacuolization, lipid inclusions, electron-dense membranes dispersed in the cytoplasm, cell disorganization and loss of parasite structural morphology. The present study demonstrated the in vitro effectiveness of (-)-\03B1-bisabolol against L. infantum, which will be used as a base for later in vivo studies.
keywords: Cães
Zoonoses
Leishmaniose Visceral
Terapia
Issue Date: 2018
Citation: SOUZA, Luzilene Maria de. Atividade de (-)-\03B1-bisabolol contra Leishmania infantum em células mononucleares de sangue periférico canino. 2018. 62 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical)-Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2018.
Date of defense: 2018
Place of defense: Rio de Janeiro
Department: Instituto Oswaldo Cruz
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz
Program: Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical
Copyright: open access
Appears in Collections:IOC - PGMT - Dissertações de Mestrado

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