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Title: Effect of the preservative and temperature conditions on the stability of Leishmania infantum promastigotes antigens applied in a flow cytometry diagnostic method for canine visceral leishmaniasis
Authors: Ker, Henrique Gama
Soares, Rodrigo Dian de Oliveira Aguiar
Roatt, Bruno Mendes
Moreira, Nádia das Dores
Vital, Wendel Coura
Carneiro, Cláudia Martins
Carvalho, Andréa Teixeira de
Martins Filho, Olindo Assis
Giunchetti, Rodolfo Cordeiro
Lemos, Denise da Silveira
Reis, Alexandre Barbosa
Affilliation: Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas. Laboratório de Pesquisas Clínicas. Ouro Preto, MG, Brazil/Universidade Federal de Ouro Preto. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas. Laboratório de Imunopatologia. Ouro Preto, MG, Brazil
Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas. Laboratório de Pesquisas Clínicas. Ouro Preto, MG, Brazil/Universidade Federal de Ouro Preto. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas. Laboratório de Imunopatologia. Ouro Preto, MG, Brazil
Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas. Laboratório de Pesquisas Clínicas. Ouro Preto, MG, Brazil/Universidade Federal de Ouro Preto. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas. Laboratório de Imunopatologia. Ouro Preto, MG, Brazil
Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas. Laboratório de Pesquisas Clínicas. Ouro Preto, MG, Brazil/Universidade Federal de Ouro Preto. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas. Laboratório de Imunopatologia. Ouro Preto, MG, Brazil
Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas. Laboratório de Pesquisas Clínicas. Ouro Preto, MG, Brazil/Universidade Federal de Ouro Preto. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas. Laboratório de Imunopatologia. Ouro Preto, MG, Brazil
Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas. Laboratório de Pesquisas Clínicas. Ouro Preto, MG, Brazil/Universidade Federal de Ouro Preto. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas. Laboratório de Imunopatologia. Ouro Preto, MG, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Renè Rachou. Laboratório de Biomarcadores de Diagnóstico e Monitoração. Belo Horizonte, MG, Brazil
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Renè Rachou. Laboratório de Biomarcadores de Diagnóstico e Monitoração. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Laboratório de Biologia das Interações Celulares. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Minas Gerais. Instituto de Ciências Biológicas. Laboratório de Imunologia e Genômica de Parasitos. Belo Horizonte, MG, Brazil
Universidade Federal de Ouro Preto. Escola de Farmácia. Departamento de Análises Clínicas. Laboratório de Pesquisas Clínicas. Ouro Preto, MG, Brazil/Universidade Federal de Ouro Preto. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas. Laboratório de Imunopatologia. Ouro Preto, MG, Brazil
Abstract: The control of canine visceral leishmaniasis (CVL) is imperative, but euthanasia of seropositive dogs has been highly criticized. Commonly used, immunodiagnostic tests, including Dual-Path Platform®, enzyme-linked immunosorbent assay, and immunofluorescent antibody test, have failed at detecting asymptomatic dogs in endemic areas. In this context, new serological methods are needed. Flow cytometry serology has demonstrated potential as a test with excellent performance for CVL. In this study, we proposed to establish the best conditions for preserving Leishmania infantum promastigote antigens employed in this serology test. During 12 months of follow-up, promastigotes were maintained in different preservatives (phosphate-buffered saline with 3% fetal bovine serum, phenol 0.35%, thimerosal 0.01%, and formaldehyde 0.5%) and stored at 3 distinct temperatures (25 °C, 4 °C, and −20 °C). During the study period, the morphological characteristics of the promastigotes were assessed by flow cytometry according to the forward and side scatter parameters and also under optical microscopic analysis. Reactivity performance was evaluated as the percentage of positive fluorescent parasites in the sera of naturally infected and noninfected dogs. Microbiological analysis was performed at 2 time points, the first and sixth months, to rule out contamination of stored promastigotes. Taken together, our results indicated that the best conditions to preserve fixed L. infantum antigens were storage in formaldehyde at 4 °C. Promastigotes presented the best morphological profile, with appropriate antigenic stability even at 4 °C, in an inexpensive preservative for a long period of conservation.
Keywords: Flow cytometry
FC-AFPA-IgG
IFAT
ELISA
Canine visceral leishmaniasis
Diagnosis
keywords: citometria de fluxo
FC-AFPA-IgG
IFAT
ELISA
Leishmaniose visceral canina
diagnostico
Issue Date: 2013
Publisher: Elsevier Biomedical
Citation: KER, Henrique Gama et al. Effect of the preservative and temperature conditions on the stability of Leishmania infantum promastigotes antigens applied in a flow cytometry diagnostic method for canine visceral leishmaniasis. Diagn Microbiol Infect Dis., v. 76, n. 4, p. 470-476, 2013
DOI: 10.1016/j.diagmicrobio.2013.04.007
ISSN: 0732-8893
Copyright: open access
Appears in Collections:MG - IRR - Artigos de Periódicos

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