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TRANSGENIC NICOTIANA TABACUM SEEDS EXPRESSING THE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS ALANINE‑ AND PROLINE‑RICH ANTIGEN
Author
Affilliation
Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia. Departamento de Genética, Evolução, Microbiologia e Imunologia. Laboratório de Genoma Funcional. Campinas, SP, Brasil / Instituto Butantan. Laboratório de Genética. São Paulo, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Imunologia e Imunogenética de Doenças Infecciosas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia. Departamento de Genética, Evolução, Microbiologia e Imunologia. Laboratório de Genoma Funcional. Campinas, SP, Brasil.
Centro Infantil de Investigações Hematológicas Dr. Domingos A. Boldrini. Laboratório de Biologia Molecular. Campinas, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária. Centro Nacional de Pesquisa de Milho e Sorgo. Sete Lagoas, MG, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia. Departamento de Genética, Evolução, Microbiologia e Imunologia. Laboratório de Genoma Funcional. Campinas, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Laboratório de Imunologia e Imunogenética de Doenças Infecciosas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia. Departamento de Genética, Evolução, Microbiologia e Imunologia. Laboratório de Genoma Funcional. Campinas, SP, Brasil.
Centro Infantil de Investigações Hematológicas Dr. Domingos A. Boldrini. Laboratório de Biologia Molecular. Campinas, SP, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária. Centro Nacional de Pesquisa de Milho e Sorgo. Sete Lagoas, MG, Brasil.
Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia. Departamento de Genética, Evolução, Microbiologia e Imunologia. Laboratório de Genoma Funcional. Campinas, SP, Brasil.
Abstract
The glycoprotein APA (Alanine- and Proline-rich Antigen, a 45/47 kDa antigen complex, Rv1860) is considered as a major immunodominant antigen secreted by M. tuberculosis. This antigen has proved to be highly immunogenic in experimental models and humans, presenting a signifcant potential for further development of a new vaccine for tuberculosis. Glycosylation plays a key role in the immunogenicity of the APA protein. Because plants are known to promote post-translational modifcation such as glycosylation and to be one of the most economic and safe hosts for recombinant protein expression, we have over expressed the APA protein in transgenic tobacco plants aiming to produce a glycosylated version of the protein. Seeds are known to be a well-suited organ to accumulate recombinant proteins, due to low protease activity and higher protein stability. We used a seed-specifc promoter from sorghum, a signal peptide to target the protein to the endoplasmic reticulum and ultimately in the protein storage vacuoles. We show that the recombinant protein accumulated in the seeds had similar isoelectric point and molecular weight compared with the native protein. These fndings demonstrate the ability of tobacco plants to produce glycosylated APA protein, opening the way for the development of secure, efective and versatile vaccines or therapeutic proteins against tuberculosis.
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