Análise funcional de enzimas da via de síntese e redução da tripanotiona em Leishmania spp

Abstract

A resistência ao antimônio em Leishmania spp. está associada com o aumento dos níveis de tripanotiona e outros tióis, e isso, está relacionado com o aumento da expressão das enzimas das vias de síntese e redução da tripanotiona. Neste estudo, análise do nível de expressão de ODC, GCS, TryS e TR nas linhagens de L. guyanensis, L. braziliensis, L. amazonensis e L. infantum(sin. L. chagasi) selvagens e resistentes ao antimônio trivalente (SbIII), mostrou que a expressão dessas enzimas varia entre as espécies analisadas e que, L. guyanensis resistente ao SbIII, foi a única espécie que apresentou aumento de expressão para todas as enzimas avaliadas. . Posteriormente, para melhor caracterizar o papel dessas enzimas na . resistência ao SbIII, realizamos ensaios de transfecção de linhagens de L. guyanensis, L. braziliensis e L. infantum com construções contendo os genes odc, gcs, trys e tr. Observamos o envolvimento da superexpressão das enzimas ODC ou GCS na proteção contra o SbIII nas linhagens de L. guyanensis e L. braziliensis, mas não em L. infantum. . A inibição farmacológica de ODC e GCS com os inibidores específicos DFMO e BSO, respectivamente, sensibilizou as linhagens de L. guyanensis que superexpressam essas enzimas ao SbIII, confirmando a importância de ODC e GCS na resistência de L. guyanensis ao SbIII. O tratamento desses parasitos com BSO aumentou o efeito leishmanicida do SbIII. . L. braziliensis superexpressora de TryS ficou mais susceptível ao SbIII e nenhuma alteração significativa foi observada em linhagens de L. guyanensis e L. infantum superexpressoras de TryS. Por outro lado, a superexpressão de TR aumentou a resistência ao SbIII em um dos clones de L. braziliensis analisados e nos dois clones de L. infantum. . Nenhuma alteração no fenótipo ao SbIII foi observada nos parasitos de . L. guyanensis superexpressores de TR. A expressão de enzimas da via de síntese e redução da tripanotiona e de enzimas da via antioxidante foram avaliadas nas linhagens de L. braziliensis e L. infantum superexpressoras e TryS ou TR. A superexpressão dessas enzimas é capaz de alterar a expressão de outras enzimas associadas e, dessa forma, regular o metabolismo desses parasitos. . Dentre os resultados obtidos, observamos que em L. braziliensis superpressora de TS ocorreu diminuição na expressão da TR e vice-versa, mostrando um mecanismo de co-regulação entre TryS e TR. Nossos dados confirmam o caráter complexo e multifatorial do fenótipo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. e ele varia entre as espécies do parasito analisadas.