Production and characterization of F(Ab')(2) fragments obtained by enzymatic digestion from Murine anti-MRSA PBP2a Monoclonal Antibodies

Abstract

Infecções causadas por Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) são problemas de saúde em todo o mundo. Em um estudo anterior, um anticorpo monoclonal murino (mMAB), capaz de se ligar a PBP2a dentro de cepas de MRSA, foi gerado. Os fragmentos de anticorpo F (ab ') 2 são amplamente descritos na literatura como ferramentas imunoquímicas e reagentes para diagnóstico e terapêutica, particularmente devido à sua baixa imunogenicidade e farmacocinética rápida. Neste estudo, os fragmentos F (ab ') 2 do mMAB foram gerados por digestão enzimática, utilizando pepsina. Eles foram purificados por cromatografia de afinidade usando proteína A e concentrada por uma unidade de filtração MWCO 50 kDa. Os resultados indicam que é possível obter fragmentos F (ab ') 2 por digestão com pepsina. Dados de ELISA, Western blotting e microscopia de fluorescência demonstraram que a afinidade F (ab ') 2 para PBP2a não se perde mesmo após o processo de digestão enzimática. Como esperado, nos testes farmacocinéticos, F (ab ') 2 apresentou uma eliminação mais rápida (entre 12 e 18 h) em comparação com IgG. Estes fragmentos F (ab ') 2 podem ser utilizados em futuras aplicações de diagnóstico imunológico, incluindo radiomarcação in vitro ou in situ e no tratamento de infecções causadas por este importante patógeno.