Efeitos da fosforilação de proteínas em Leishmania (L.) amazonensis

Abstract

Leishmania spp. são protozoários parasitas causadores de várias patologias humanas, que incluem desde úlceras cutâneas simples, com resolução espontânea, até comprometimento visceral, potencialmente fatal. O ciclo de vida do parasito apresenta duas formas evolutivas e numerosos morfotipos. A diferenciação durante o ciclo evolutivo do parasito é induzida por modificações no microambiente e é controlada, entre outros fatores, por um complexo balanço entre fosforilação e defosforilação de proteínas específicas, principalmente em resíduos de tirosina, serina e treonina. Ao contrário de células de mamíferos, pouco se conhece a cerca das cascatas de sinalização de protozoários. Nesse estudo foram testados os efeitos dos inibidores de proteína cinases estaurosporina, genisteína e tirfostina 25 na proliferação in vitro de L. (L.) amazonensis. Concentrações a partir de 1 µM de estaurosporina resultaram no completo bloqueio do crescimento celular. Genisteína (10-100 µM) e tirfostina 25 (50-150 µM) inibiram o crescimento de forma dose-dependente. O perfil eletroforético dos parasitos tratados não revelou modificações significativas na expressão de proteínas, mas a fosforilação em resíduos de tirosina e serina foi diminuída. A análise por microscopia eletrônica de transmissão dos parasitos revelou alterações na morfologia mitocondrial, no empacotamento do kDNA, no número de corpúsculos basais e flagelos e, em algumas células, um grande aumento no volume da bolsa flagelar, sugerindo alterações nas vias endocítica e/ou exocítica. Com o objetivo de abordar tais vias neste parasito, estudamos bioquimicamente e citoquimicamente a atividade fosfatase ácida. Parasitos tratados com os três inibidores por 1 h e 24 h apresentaram atividade fosfatase ácida secretada significativamente diminuída. Com a finalidade de estudar as vias de sinalização doparasito na interação com a célula hospedeira, promastigotas pré-tratados com os antagonistas foram incubados com macrófagos peritoneais. Observamos que estaurosporina 1 µM inibiu, de forma significativa, a internalização e a sobrevivência intracelular dos parasitos. Nossos dados sugerem que inibidores de proteína cinases podem exercer efeitos na morfologia, infectividade e proliferação de Leishmania, bloqueando o ciclo celular desses parasitos.