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Title: Isolamento e caracterização molecular dos agentes da criptococose em poeira domiciliar em bairros de Santa Isabel do Rio Negro no estado do Amazonas
Advisor: Lazéra, Márcia dos Santos
Costa, Filipe Anibal Carvalho
Members of the board: Mota, Fabio Faria da
Rodrigues, Marcio Lourenço
Santos, Marcia Chame dos
Paes, Rodrigo de Almeida
Trilles, Luciana
Authors: Santos, Fabio Brito dos
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract: A criptococose coloca-se entre as infecções fúngicas humanas de significativa letalidade e morbidade, principalmente sob forma de meningoencefalite. Esta micose, de natureza sistêmica, com porta de entrada inalatória, é causada por leveduras patogênicas do chamado complexo Cryptococcus neoformans/Cryptococcus gattii. A micose é de distribuição mundial e seus agentes C. neoformans e C. gattii juntos apresentam oito principais tipos moleculares presente em todo mundo. C. gattii e seus tipos moleculares (VGI, VGII, VGIII e VGIV) são menos comuns, representando 20% das infecções, enquanto C. neoformans (VNI, VNII, VNII e VNIV) e seus tipos moleculares 80%. O tipo molecular mais comum encontrado no Brasil é VNI, seguido por VGII, VNII, VGIII, VNIV, VGI e VNIII. A criptococose primária causada pelo tipo molecular VGII (sorotipo B, MATalfa), prevalece em pacientes imunocompetentes nas regiões Norte e Nordeste do Brasil, revelando um padrão regional endêmico para este tipo molecular. O perfil emergente dessa micose tem motivado inúmeros estudos de fontes ambientais de risco para humanos e animais. A exposição a propágulos dispersos no meio ambiente inicia o processo infeccioso, relacionado a diversos substratos orgânicos e, pode ocorrer também a partir de fontes domiciliares ou peri-domiciliares. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença dos agentes da criptococose em poeira domiciliar na região do alto do Rio Negro, no município de Santa Isabel do Rio Negro no estado do Amazonas. As metodologias utilizadas foram: coleta e isolamento dos fungos a partir de poeira domiciliar; identificação fenotípica e genotípica das colônias pelas técnicas de "Restriction Fragment Lengh Polimorphism" (RFLP) do gene URA5 e "Multilocus Sequence Typing" (MLST); e determinação do tipo sexuado (mating type) por técnica de PCR Cinquenta e uma casas foram visitadas, sendo que destas, três casas foram exclusivamente positivas para C. gattii tipo molecular VGII tipo sexuado MATalfa, apresentando significativa densidade deste agente (50, 2.500 e 50.000 UFC/g de poeira cada). Os estudos por MLST identificaram 8 subtipos de C. gattii VGII distribuídos nos 3 domicílios. Quatro subtipos foram identificados no domicílio DW-650 com o predomínio do VGIIb (ST7), genótipo predominante na Austrália e também relatado no Canadá. No segundo domicílio, 4 subtipos foram identificados, com predomínio do subtipo VGIIa (ST20), mais virulento e predominante na epidemia do Canadá. O último domicílio (SI444) apresentou um único subtipo VGIIb (ST7). Além de VGIIa e VGIIb, um total de 5 subtipos novos e exclusivos da região estudada foram identificados (STs 264, 265, 266, 267, 268), bem como um subtipo (ST5) já descrito previamente na Austrália. Pela primeira vez no estado do Amazonas, C. gattii VGII MAT alfa foi isolado do meio ambiente e se correlaciona com a criptococose endêmica por este agente neste estado. Esse foi o primeiro estudo de MLST descrevendo isolados ambientais na Amazônia brasileira, apontando poeira domiciliar como fonte potencial para a infecção humana por diferentes subtipos de C. gattii VGII MATalfa.
Abstract: Cryptococcosis is a human fungal infection of significant mortality and morbidity, especially in the meningoencephalitis form. This systemic mycosis is acquired by inhalation and caused by the pathogenic yeast complex known as Cryptococcus neoformans/Cryptococcus gattii. Cryptococcosis is distributed worldwide and their agents, C. neoformans and C. gattii, together present eight major molecular types. C. gattii and its molecular types (VGI, VGII, VGIII, and VGIV) are less common, accounting for 20% of infections, while C. neoformans molecular types (VNI, VNII, VNIII, and VNIV) accounts for 80%. The most common molecular type found in Brazil is VNI, followed by VGII, VNII, VGIII, VNIV, VGI and VNIII. The primary cryptococcosis caused by molecular type VGII (serotype B, MAT alpha) prevails in immunocompetent patients in the North and Northeast of Brazil, revealing an endemic regional pattern to this molecular type. The emerging profile of this mycosis has motivated numerous studies of potential environmental sources to humans and animals. Exposure to propagules dispersed in the environment initiates the infection process, related to various organic substrates and can also occur from sources around dwellings. The present study aimed to investigate the presence of the agents of cryptococcosis in dust from dwellings in the upper Rio Negro, municipality of Santa Isabel do Rio Negro in Amazonas state. The methodologies used were: collection of dust and isolation of the fungi; phenotypic and genotypic identification of colonies by the techniques of restriction fragment length polymorphism (RFLP) and Multilocus Sequence Typing (MLST), and identification of the mating type by PCR. Fifty-one houses were visited, and only three of them were positive for C. gattii molecular type VGII, MAT alpha, showing significant density of this agent (50, 2,500 and 50,000 UFC / g of dust in each one). MLST studies identified eight subtypes of C. gattii VGII distributed in 3 households. Four subtypes have been identified in the household DW-650 with dominance of VGIIb (ST7), predominant genotype in Australia, and also reported in Canada. In the second house, four subtypes were identified, with a predominance of subtype VGIIa (ST20), more virulent and prevalent in the Canada epidemic. The last house (SI444) showed a single subtype VGIIb (ST7). Besides VGIIa and VGIIb, a total of 5 new subtypes and exclusive of the region studied have been identified (STs 264, 265, 266, 267, 268) as well as a subtype (ST5) previously described in Australia. For the first time in the state of Amazonas, C.gattii VGII MAT alpha was isolated from the environment and correlates with endemic cryptococcosis by this agent in this state. This was the first study describing MLST subtypes on environmental isolates in the Brazilian Amazon, appointed domiciliary dust as a potential source for human infection with different subtypes C.gattii VGII MAT alpha.
Keywords: Cryptococcosis agentes
Dust indoor
Santa Isabel do Rio Negro/AM
MLST
keywords: Agentes da Criptococose
Poeira domiciliar
Santa Isabel do Rio Negro/AM
MLST
DeCS: Criptococose
Poeira
Issue Date: 2013
Citation: SANTOS, Fabio Brito dos. Isolamento e caracterização molecular dos agentes da criptococose em poeira domiciliar em bairros de Santa Isabel do Rio Negro no estado do Amazonas. 2013. 83 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical)-Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, 2013.
Date of defense: 2013
Place of defense: Rio de Janeiro/RJ
Department: Pós-Graduação em Medicina Tropical
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz
Program: Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical
Copyright: open access
Appears in Collections:IOC - PGMT - Dissertações de Mestrado

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