Seleção in silico de genes alterados pela exposição ao benzeno e avaliação do padrão de metilação de LINE-1 em trabalhadores de postos de combustíveis na zona oeste do Rio de Janeiro/RJ

Abstract

Trabalhadores de postos de combustíveis estão expostos há diversas substâncias químicas presentes no ambiente de trabalho, destacando-se entre elas o benzeno, por ser comprovadamente cancerígeno para seres humanos. O objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações nos padrões de metilação do DNA de uma população exposta ocupacionalmente ao benzeno, em Postos de revenda de combustíveis (PRC) na Zona Oeste do município do Rio de Janeiro, como um possível biomarcador precoce a esta exposição, com intuito de estabelecer medidas de promoção à saúde dos trabalhadores e de redução dos níveis de benzeno no ar. Para tanto, foi utilizado metodologia para seleção de genes por meio de bioinformática com análises de dados em larga escala e foram desenvolvidas e padronizadas metodologia analíticas (como extração de DNA por salting out, eletroforese em gel de agarose, amplificação por PCR e conversão de DNA por bissulfito de sódio) para avaliar o padrão de metilação de DNA por pirosequenciamento no gene selecionado por bioinformática, no retrotransposon LINE-1 e no gene CDKN2B. Com o uso dos softwares de bioinformática, foi possível selecionar três possíveis biomarcadores (KLF6, JUN, KLF4) e dentre os três o gene KLF6 foi escolhido para este estudo. Participaram do estudo 88 trabalhadores, sendo 52 oriundos de 7 postos de combustíveis localizados nos bairros de Santa Cruz, Paciência e Sepetiba da AP5.3 e 35 trabalhadores expostos ambientalmente, pertencentes as portarias da fiocruz, dos quais apenas 12 (devidos as perdas ao longo das análises) trabalhadores (9 de postos de combustíveis e 3 das portarias) tiveram seus níveis de metilação mensurados. Neste trabalho só foi possível avaliar metilação para o retrotransposon LINE-1, para o qual os níveis médios de metilação para este gene, entre os trabalhadores, foram de 67,7 para os trabalhadores de postos de combustíveis e 68,4. As alterações que foram observadas nas populações estudadas são pequenas em valores, mas representam uma alteração precoce induzida pela exposição aos padrões normais de metilação demonstrando o potencial desta abordagem para contribuir na identificação de um biomarcador precoce de exposição à baixas doses de benzeno (precoce em relação aos desfechos à saúde relacionados ao metabolismo do benzeno, como alterações em leucócitos), impactando no estabelecimento de medidas de promoção a saúde dos trabalhadores.