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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34542
AVALIAÇÃO PARASITOLÓGICA E DE PARÂMETROS CELULARES E HUMORAIS DA RESPOSTA IMUNE ASSOCIADOS À INFECÇÃO E REINFECÇÃO PELO SCHISTOSOMA MANSONI NAS LINHAGENS MURINAS C57BL/6 E BALB/C
Camundongos Endogâmicos BALB C
Camundongos Endogâmicos C57BL
Schistosoma mansoni
Camundongos Endogâmicos BALB C
Camundongos Endogâmicos C57BL
Alves, Clarice Carvalho | Date Issued:
2011
Alternative title
Evaluating and parasitological parameters cellular and humoral immune response associated with infection and reinfection with Schistosoma mansoni in murine strains C57BL/6 and BALB/cAuthor
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Abstract in Portuguese
Com o objetivo de gerar novos conhecimentos acerca da interação parasitohospedeiro, o presente trabalho avaliou parâmetros parasitológicos e imunológicos associados ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro definitivo após a infecção e reinfecção pelo S. mansoni, nas linhagens murinas BALB/c e C57BL/6. Para tanto, a avaliação dos parâmetros parasitológicos foi realizada utilizando animais das linhagens BALB/c e C57BL/6 infectados e reinfectados. Os animais infectados e reinfectados, 50 dias pós-infecção/reinfecção foram perfundidos para avaliação da carga parasitária. Dois dias antes da perfusão foi realizado o exame de fezes
utilizando as metodologias HPJ e Eclosão de Miracídios. O número de ovos
presentes no intestino e no fígado dos animais foram determinados através da digestão dos órgãos utilizando KOH 10%. Além disso, o peso dos animais foi avaliado durante todo o período de infecção, tratamento e reinfecção. Para realizar a avaliação da resposta celular, o baço de camundongos, de ambas as linhagens, infectados, infectados/tratados e reinfectados, bem como de camundongos não infectados, foram retirados nos dias 3, 7, 15, 30, 60, 110 e 155 pós infecção/reinfecção para a obtenção e cultura de esplenócitos que foram estimulados, ou não, com SEA, extrato de verme adulto (AWA) e Ag. de Esquistossômulo. Os sobrenadantes das culturas dos esplenócitos foram coletados após 24 (para a quantificação das citocinas IL-4 e TNF-α) e 72 horas (para as citocinas IL-10, IL-17, IL-13, IFN-γ) de incubação. Os soros dos animais infectados e reinfectados, e de seus controles, foram obtidos nos dias 3, 7, 15, 30, 60 e 110 pós infecção/reinfecção para a avaliação da resposta humoral. Foram dosados os anticorpos IgG total, e seus subtipos IgG1 e IgG2c, específicos para SEA, AWA e Ag. de esquistossômulo, através da técnica de ELISA. Quanto à avaliação parasitológica, não foi possível observar diferença significativa em relação à carga parasitária pós-infecção/reinfecção em camundongos de mesma linhagem, bem como, entre os animais de linhagens diferentes. Também não foi observada diferença estatisticamente significativa no número de ovos/miracídios nas fezes de camundongos pós-infecção ou pós-reinfecção em ambas as linhagens. Em relação ao número de ovos retidos nos órgãos, observou-se diferença estatisticamente significativa apenas no fígado. Nesse órgão, os animais BALB/c reinfectados apresentaram um reduzido número de ovos em relação aos animais BALB/c infectados e aos C57BL/6 reinfectados. Quanto à produção das imunoglobulinas, os
camundongos C57BL/6 reinfectados apresentaram maior produção de IgG2c e os animais BALB/c reinfectados maior produção de IgG1. Camundongos C57BL/6 apresentaram um perfil misto de produção de citocinas do tipo 1/tipo 2, com produção das citocinas IL-10 e IL-13 ao longo de toda a infecção/reinfecção, sendo também considerável a produção das citocinas IFN-γ e TNF-α.. Os animais BALB/c produziram as citocinas IL-13 e IL-10 ao longo de toda a infecção/reinfecção, porém foram os únicos a produzirem a citocina IL-4 durante todo o tempo de infecção e reinfecção. Os resultados do nosso trabalho puderam apontar as principais diferenças imunológicas e parasitológicas entre as linhagens murinas BALB/c e C57BL/6 durante a infecção e/ou reinfecção pelo Schistosoma mansoni contribuindo para a geração de novos conhecimentos acerca dos mecanismos imunológicos
desencadeados em resposta ao desenvolvimento do parasito no hospedeiro
definitivo tanto durante infecção quanto reinfecção.
Abstract
In order to generate knowledge about the parasite-host interaction, this study
assessed parasitological and immunological parameters associated with the parasite development within the definitive host, after infection and reinfection with S. mansoni, in the murine BALB/c and C57BL/6 strains. The evaluation of parasitological parameters was performed using infected and reinfected BALB/c and C57BL/6 mice. Fifty days after infection/reinfection, these mice were perfused for evaluation of worm burden. Two days before perfusion, a stool exammination was performed using HPJ and Miracidia Eclosion methodologies. The intestine and liver of these mice were removed during the perfusion, weighed and digested with 10% KOH to assess the number of eggs present in those organs. Moreover, the weight of the animals was
monitored throughout the period of infection, treatment and reinfection. In order to evaluate the cellular immune response, the spleens of infected and reinfected mice from both strains, as well as from uninfected mice (control group) were removed on days 3, 7, 15, 30, 60, 110 and 155 post-infection/reinfection to perform splenocyte cultures, stimulated or not with SEA, adult worm antigen preparation (AWA) and schistosomula antigen. The supernatants of the cultures were collected after 24 (for quantification of IL-4 and TNF-α) and 72 hours (for IL-10, IL-17, IL-13, IFN-γ) post stimulation. Sera from infected and reinfected mice, as well as from their controls,
were obtained on days 3, 7, 15, 30, 60 and 110 post-infection/reinfection to assess the humoral response. Total IgG, and its subtypes IgG1 and IgG2c, specifics for SEA, AWA and schistosomula antigen, were measured by ELISA. Regarding the parasite evaluation, no significant difference was found in worm burden recovered from infected and reinfected mice in the same mice strain, as well as between animals from different strains. There was also no statistically significant difference in the number of eggs/miracidia in the stools of both strains of mice post-infection or post-reinfection. Regarding the number of eggs retained in the organs, there was a statistically significant difference in the number of eggs trapped in the liver..
Reinfected BALB/c mice showed a reduced number of eggs in this organ when compared to infected BALB/c and C57BL/6 reinfected mice. Significant levels of specific antibodies were detected in reinfected animals of both strains. It was observed some difference in the immunoglobulins IgG1 and IgG2c production, and C57BL/6 reinfected mice showed higher production of IgG2c whereas BALB/c reinfected mice showed higher production of IgG1. C57BL/6 mice showed a mixed type 1/type 2 cytokine profile, with production of IL-10 and IL-13 throughout the infection/reinfection, and a considerable production of cytokines IFN-γ and TNF-α, after infection and reinfection. Similarly, BALB/c mice produced IL-13 and IL-10 cytokines throughout the infection / reinfection. Furthermore, BALB/c mice were the only ones to produce IL-4 cytokine during the period of infection and reinfection. The
results of our study pointed the major immunological and parasitological differences between BALB/C and C57BL/6 murine strains during Schistosoma mansoni infection and/or reinfection contributing to generate new knowledge about the immune mechanisms triggered in response to the development of the parasite in the definitive host during infection and reinfection.
Keywords in Portuguese
Esquistossomose mansoniCamundongos Endogâmicos BALB C
Camundongos Endogâmicos C57BL
DeCS
Esquistossomose mansoniSchistosoma mansoni
Camundongos Endogâmicos BALB C
Camundongos Endogâmicos C57BL
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