O impacto de cepas de Leishmania braziliensis isoladas de hospedeiros com diferentes formas clínicas na interação com macrófagos murinos

Abstract

Leishmania (Viannia) braziliensis é o agente etiológico da leishmaniose tegumentar americana (LTA) podendo causar diferentes formas clínicas: leishmaniose cutânea (CL), muco-cutânea (LMC) e lesões atípicas (LAT). Estas últimas podem apresentar-se como pápulas, placas, nódulos verrucosos, lesões vegetativas e/ou lupóides. Nossa hipótese de trabalho seria quais os fatores responsáveis por estas diferentes manifestações clínicas dentro desta espécie. Foram avaliados diferentes parâmetros relacionados à infectividade do parasito: 1) papel do lipofosfoglicano (LPG) na interação com macrófagos peritoneais; 2) avaliação dos parasitos na biogênese de fagossomos em macrófagos medulares (BMMs); 3) avaliação e quantificação da expressão de LPG e GP63 na superfície dos parasitos e, 4) caracterização preliminar de LPGs purificados destes parasitos. Utilizamos seis cepas/isolados de L. braziliensis: M2903, RR051 e RR418 (lesões típicas), RR410 (atípica), M15991 (muco-cutânea) e M8401 (cepa isolada de vetor). LPGs das diferentes cepas/isolados de L. braziliensis foram extraídos e purificados. Macrofágos peritoneais de camundongos 57BL/6 e respectivos knock-outs (TLR2 -/- e TLR4 -/-) foram estimulados por estes LPGs para a produção de óxido nítrico (NO) e citocinas. Os LPGs, dependendo da forma clínica da cepa de que foram purificados, ativaram diferencialmente a produção de NO e citocinas (TNF-α, IL-6, IL-12) via LR4. Não houve produção de IL-1β. Νο próximo passo, incubamos os mesmos LPGs em presença de zimozan. Os LPGs aderidos ao zimozam foram incubados com BMMs para a avaliação do marcador de biogênese LAMP1 (recrutamento e fagocitose). Não foi observada diferenças na biogênese de fagossomos de BMMs incubados com zimozan e LPGs das diferentes cepas/isolados. Posteriormente, os parasitos foram opsonizados e incubados em presença dos BMMs para a avaliação infecção. A cepa RR410 (atípica) apresentou um índice de infectividade menor quando comparada às outras cepas. Estes mesmos experimentos foram realizados na presença de LAMP1 e Lysotracker (fagocitose e acidificação). Os parasitos induziram diferenças na biogênese de fagossomos dependendo da cepa/isolado. Por exemplo, a cepa atípica (RR410) foi menos fagocitada que as outras, enquanto a cepa M15991 (muco-cutânea) acidificou menos o fagolissomo. Para a avaliação da expressão de LPG e GP63, foi observado em comparação aos controles (Leishmania donovani e Leishmania major) que ambos glicoconjugados estavam menos expressos na superfície de L. braziliensis. Nossos resultados demostraram que diferentes isolados de L. braziliensis de diferentes formas clínicas e hospedeiros podem induzir diferentes respostas em células do hospedeiro vertebrado. Este efeito se deu principalmente, na fagocitose, produção de NO e citocinas, desfechos na biogênese dos fagossomos e expressão de glicoconjugados (LPG e GP63). A caracterização preliminar das unidades repetitivas do LPG detectou polimorfismos que podem justificar os diferentes padrões de ativação em macrófagos peritoneais e de infecção com os parasitos inteiros.