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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/35560
CARACTERIZAÇÃO GENÔMICA E BIOLÓGICA DO VÍRUS DO SARAMPO CEPA VACINAL CAM-70
CAM-70
Fibroblastos de embrião de galinha
Sequência
Interferom
Borges, Maria Beatriz Junqueira | Date Issued:
2007
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos (Bio-Manguinhos). Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
Bio-Manguinhos possui a capacidade instalada de produção da vacina contra o sarampo utilizando a cepa viral Biken CAM-70. No momento, esta vacina não está sendo produzida devido à utilização, pelo Ministério da Saúde, da vacina tríplice viral (sarampo, caxumba e rubéola) nas campanhas de vacinação. Entretanto, o potencial de atender a mercados externos com uma vacina monovalente contra o sarampo, faz com que, a qualquer momento, a produção seja retomada. Neste contexto, a caracterização genômica e biológica deste vírus vacinal pode contribuir para a introdução de melhorias no processo de produção e nos fornecer dados para um maior conhecimento do nosso produto. Para avaliar a estabilidade genética da cepa CAM-70 foram realizadas dez passagens
do vírus semente FMS-7 em culturas primárias de embrião de galinha (“chicken embryo fibroblast” = CEF). Os genomas do vírus semente FMS-7, do vírus proveniente do frasco de vacina (correspondente à 3ª passagem = VSF-3) e da 10ª passagem (VSF-10) foram seqüenciados e comparados entre si e com as seqüências disponíveis de vacinas de sarampo. O resultado do seqüenciamento nucleotídico direto de FMS-7, VSF-3 e VSF-10 revelou seqüências genômicas idênticas, demonstrando uma grande estabilidade genética deste vírus nas condições de cultivo empregadas.
Neste trabalho investigamos também a influência do interferon (IFN) no rendimento viral. Culturas de CEF em alta densidade (AD) e baixa densidade (BD) celular foram inoculadas com CAM-70 e coletadas diariamente por um período de até 15 dias. As suspensões provenientes destas culturas foram tituladas em um teste para detecção de IFN e avaliados quanto à expressão da enzima 2-5 oligoadenilato sintetase (2-5OAS). O vírus CAM70 foi capaz de induzir a produção de IFN em CEF, como foi demonstrado através dos ensaios de titulação e pela expressão gênica de 2-5 OAS. A obtenção de títulos virais mais elevados em BD sugere que este vírus seja sensível ao IFN. O resultado obtido nos ensaios de IFN recomenda a produção da vacina em culturas em BD para o alcance de maiores rendimentos virais. Este estudo também demonstra que o vírus CAM-70 é altamente estável do ponto de vista genético, dentro dos parâmetros de produção. Esta estabilidade permite a extensão do uso dos lotes sementes de vacina e contribui para o perfil de segurança da vacina contra o sarampo confeccionada com o vírus CAM-70.
Abstract
Bio-Manguinhos has the competence for producing a measles vaccine using the Biken CAM-70 strain. Since the Ministry of Health adopted the MMR vaccine for vaccination campaigns, the production of the monovalent measles vaccine was discontinued. However, the export potential of a monovalent measles vaccine justifies the restart of production. Therefore, the genomic and biological characterization of this vaccine virus may greatly
contribute to the introduction of improvements in the production process and in providing data for the knowledge of our product. To evaluate the genetic stability of the CAM-70 measles vaccine strain we have performed ten serial passages of the seed lot virus FMS-7 in chicken embryo fibroblasts primary cultures (CEF) under production conditions. The nucleotide sequences of the seed lot virus, the virus from a vaccine vial (third passage) and from the tenth passage were determined and compared with each other and with all available measles vaccine sequences. The results obtained for the seed virus FMS-7, for the virus from a vaccine lot (third passage) and passage ten have revealed identical genomic sequences and demonstrate that the measles CAM-70 vaccine virus is highly adapted to its cultivation conditions and genetically stable under these conditions. In this study we have also investigated the influence of interferon (IFN) in virus yields. CEF cultures in high density (HD) and low density (LD) were inoculated with the CAM-70 virus and collected daily for up to 10 days. The suspensions originated from these cultures were titrated in a test for IFN detection and evaluated for the expression of the enzyme 2-5 oligoadenilate synthetase (2-5OAS). The CAM-70 virus was able to induce the production of IFN in CEF as demonstrated by the IFN titration assays and the expression of 2-5 OAS. The observation of higher virus titers in LD cultures suggests that this virus is sensitive to IFN. IFN results recommend the production of vaccine in LD cultures for the achievement of higher virus yields. This study also demonstrates that the CAM-70 virus is highly stable from the genetic point of view, under production conditions. This stability allows the extension of the use of the seed lots and contributes for the safety profile of the measles
vaccine manufactured with the CAM-70 strain.
Keywords in Portuguese
Vírus do SarampoCAM-70
Fibroblastos de embrião de galinha
Sequência
Interferom
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