Otimização e validação de método analítico para determinação simultânea de citrato e fosfato em soluções anticoagulantes de bolsas de sangue por CLAE

Abstract

As bolsas de sangue são produtos de alta complexidade, classificados como risco III, essas se destinam a coletar, armazenar e transferir o sangue de forma eficiente e segura. A referência nacional para análises deste produto é o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS/FIOCRUZ), responsável pelas análises prévias ao registro e controle destes produtos. A Resolução RDC nº 35 de 2014 fixa as condições exigíveis para bolsas de sangue com soluções anticoagulantes e/ou preservadoras. O citrato total e o fosfato diácido de sódio monohidratado, presentes nas soluções anticoagulantes e/ou preservadoras, possuem grande importância na manutenção da viabilidade do sangue coletado. O método proposto utiliza a cromatografia de íons e permite a determinação simultânea do teor de citrato total e fosfato diácido de sódio monohidratado nas soluções anticoagulantes, reduzindo o tempo de análise. Neste contexto o objetivo deste estudo foi realizar a otimização e a validação do método analítico para a determinação simultânea de citrato e fosfato em soluções anticoagulantes de bolsas de sangue por cromatografia líquida de alta eficiência utilizando a detecção iônica. Sendo este estudo dividido em quatro etapas: a avaliação retrospectiva das amostras, a comparação dos métodos analíticos, o planejamento da validação analítica compreendendo a adequação do sistema e a otimização da metodologia e a validação analítica. A seleção das amostras de trabalho foi realizada considerando a avaliação retrospectiva das amostras submetidas ao INCQS no período de 2012 a 2016. Foram avaliadas as condições analíticas dos métodos de análise individual e concomitante destas substâncias. A otimização da metodologia analítica, segunda etapa, foi avaliado o fluxo da fase móvel e a diluição das amostras e padrões permitindo a redução do tempo de análise e o custo operacional com eficiência de separação comprovada pelos parâmetros de adequação do sistema cromatográfico. A validação analítica, terceira etapa do estudo, foi realizada conforme os parâmetros recomendados pela Anvisa, na RE nº 899 de 2003 e a Resolução nº 166 de 2017, e pelo Inmetro, no manual orientativo DOQ-CGCRE-008 de 2016. Na comparação dos métodos, a avaliação estatística demonstrou que não há diferença significativa entre os dois métodos para as análises realizadas. Na etapa de validação analítica, a seletividade, a linearidade, os limites de detecção e quantificação, a precisão, a exatidão e a robustez apresentaram resultados satisfatórios que comprovaram a confiabilidade do método, indicando que este é reprodutível. O estudo permitiu comparar as condições analíticas e apresentar os aspectos relevantes da implementação do método alternativo, principalmente, por permitir determinar simultaneamente os analitos de interesse. A validação deste método alternativo, atende aos critérios tanto da Anvisa quanto do Inmetro, o novo método possibilita a diminuição do custo das análises e a possível alteração da legislação vigente no que se refere à normatização de bolsas de sangue utilizadas no Brasil. Além disso, sugere novos avanços no controle da qualidade deste produto e reitera a participação do INCQS em aspectos regulatórios de âmbito sanitário.