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2020-09-24
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COMPARISON OF PCR PROTOCOLS FOR DETECTING HISTOPLASMA CAPSULATUM DNA THROUGH A MULTICENTER STUDY
Alternative title
Comparación de protocolos de la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detección de ADN de Histoplasma capsulatum a través de un estudio multicéntricoAuthor
Affilliation
Abstract
Background: A multicenter study was conducted. A panel containing DNA from Histoplasma capsulatum, as well as negative and cross-reaction controls, was sent to five different laboratories, members of the MICOMOL network from CYTED Program. Aims: The objective was to assess the accuracy of different PCR protocols to detect H. capsulatum DNA. Methods: Seven different PCR protocols were tested. They were based on PCR techniques and used unicopy and multicopy targets. Results: Most of these protocols (4/7) were able to detect the smallest amounts of fungal DNA (10x10 fg/μl). Overall sensitivity was 86% and specificity was 100%. The protocol based on a unicopy target (SCAR220) presented lower sensitivity (43%) but 100% specificity. The real-time protocols tested were highly reproducible, sensitive, and specific. Neither false positives nor cross-reactions were detected in any protocol. Conclusions: All laboratories were able to amplify H. capsulatum DNA, and real-time PCR seems to be a promising tool to efficiently detect this pathogen in clinical samples.
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Antecedentes: Se realizó un estudio multicéntrico en el que participaron cinco laboratorios miembros de la red MICOMOL a partir del programa CYTED. Los participantes recibieron un panel que contenía muestras de ADN de Histoplasma capsulatum, al igual que paneles con muestras de control negativas y de reacciones cruzadas.
Objetivos: El objetivo del presente estudio fue examinar la precisión de los diferentes protocolos de PCR
para la detección de ADN de H. capsulatum. Métodos: Se examinaron siete protocolos, todos ellos basados en técnicas de PCR, que empleaban como diana plásmidos unicopia o multicopia. Resultados: la mayoría de estos protocolos (4/7) pudieron detectar las cantidades más pequenas de ADN (10x10 fg/μl). La sensibilidad global fue del 86% y la especificidad del 100%. El protocolo basado en el plásmido unicopia SCAR220 se asoció a la menor sensibilidad (43%) pero a una especificidad del 100%. Los protocolos de PCR en tiempo real fueron muy reproducibles, sensibles y específicos. En ningún caso se detectaron resultados falsos positivos ni reacciones cruzadas.
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