Capillary zone electrophoresis method for the direct determination of amino acids in recombinant human erythropoietin preparations used for the treatment of anemia

Abstract

Foi desenvolvido um método baseado em CZE para a determinação de formulação biofarmacêutica de ácido glutâmico, glicina e alanina contendo eritropoietina humana recombinante. A separação foi realizada em menos de 5 minutos, utilizando uma coluna capilar de sílica fundida (55 cm × 50 m id) e tampão de fosfato 30 mmol / L a pH 11,5, contendo CTAB a 0,6 mmol / L e metanol a 10% v / v , como solução BGE. Utilizou-se potencial aplicado de –25 kV, temperatura de 15 ° C e tempo de injeção hidrodinâmica de 15 s, a 50 mbar. A detecção dos analitos foi realizada sem nenhuma reação de derivatização, a 220 nm, utilizando um detector UV-DAD. Foram obtidos intervalos lineares de 50 a 2500 mg / L e limites de quantificação de 40, 39 e 37 mg / L para ácido glutâmico, glicina e alanina, respectivamente. A preparação da amostra exigiu apenas uma etapa de diluição. Considerando a área de pico e os tempos de migração, o método apresentou boa repetibilidade (RSD 1,7%; n = 9) e precisão intermediária (RSD 1,0%; n = 6). A avaliação da recuperação utilizando uma amostra comercial apresentou valores entre 97,5 ± 5,2% e 101,5 ± 4,6%, demonstrando a viabilidade do método, o qual foi aplicado com sucesso na quantificação dos aminoácidos de interesse em amostras biofarmacêuticas.