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Title: Tipagem molecular e investigação dos genes toxigênicos em staphylococcus aureus isolados de amostras clínicas
Other Titles: Molecular typing and research of toxigenic genes in Staphylococcus aureus isolated from clinical samples
Advisor: Balbino, Tereza Cristina Leal
Leal, Nilma Cintra
Authors: Andrade, Mariana de Azevedo
Affilliation: Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil.
Abstract: Os estafilococos são bactérias oportunistas, vastamente distribuídas na natureza e fazem parte da microbiota normal da pele e mucosas de mamíferos e aves. Staphylococcus aureus é o patógeno humano de maior importância entre os estafilococos por causar infecções severas, de origem comunitária e hospitalar. Além de infecções da pele, S. aureus pode causar intoxicação alimentar, por produzir enterotoxinas (SEs); Síndrome da Pele Escaldada, causada pela produção de toxinas esfoliativas (ETA e ETB) e síndrome do choque tóxico, causada pela toxina 1 da síndrome do choque tóxico (TSST-1). Neste estudo, foram analisados oitenta isolados clínicos de S. aureus, oriundos de diversas fontes de infecção e diferentes setores de um hospital público da cidade do Recife/PE. A PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) foi aplicada para detecção dos genes das toxinas estafilocócicas e uma variação da PCR, a PCRmultiplex, permitiu numa mesma reação detectar vários genes responsáveis pelas exotoxinas, contribuindo para o estudo da epidemiologia da bactéria mencionada e seu envolvimento em infecções humanas. Foi investigada, também, a diversidade dos isolados de S. aureus e sua distribuição no ambiente hospitalar, através da análise do polimorfismo da região 3’ terminal do gene da coagulase (PCR coa) e da região intergênica 16S-23S dos operons ribossomais (ribotipagem-PCR). Os genótipos dos genes toxigênicos encontrados entre os isolados de S. aureus foram seg, isoladamente, ou em associações, seg + sec, seg + sea, seg + seb, seg + tst, seg + eta, seg + seh, seg + sec + tst, seg + sea + seh, seg + sea + seb + seh. O gene mais freqüente foi seg, presente em todas as amostras positivas, 79/79 (100%), seguido por seh, 10/79 (12,7%) e sea, 09/79 (11,4%). A PCR-coa revelou quatro coagulotipos (Perfil 1-4), sendo o perfil 2 (~800pb) o mais prevalente presente em 39/80 (48,75%) isolados. A ribotipagem-PCR demonstrou 3 a 7 fragmentos de 390 a 680pb, distribuídos em onze ribotipos (R1-R11). R1 e R4 foram os ribotipos mais comuns, presentes em 28,75% dos isolados estudados. Os coagulotipos e ribotipos foram distribuídos nos três setores do hospital (ambulatório, enfermaria e UTI). Estes dados revelaram um grande polimorfismo genético e demonstraram uma dispersão clonal dos S. aureus neste ambiente hospitalar.
Abstract: Staphylococci are opportunistic bacteria, vastly distributed in nature, and they are part of the normal microbiota of the skin and mucosal tissues of mammals and birds. Staphylococcus aureus is the most important human pathogen among the staphylococci and has the capacity to cause severe infections of community and hospital origin. Besides infections of the skin, S. aureus can cause food poisoning by producing enterotoxins (SEs), scalded skin syndrome caused by the production of exfoliative toxins (ETA and ETB), and toxic shock syndrome caused by toxic shock syndrome toxin 1 (TSST-1). We studied eighty clinical isolates of S. aureus from various sources of infections and different sectors of a public hospital in the city of Recife, PE. PCR (Polymerase Chain Reaction) was used for the detection of the genes of staphylococcal toxins, and a variation of PCR, multiplex PCR, allowed in the same reaction the detection of various genes responsible for exotoxins, contributing to the epidemiologic study of these bacteria and their involvement in human infections. Also investigated was the diversity of the S. aureus strains and their distribution in the hospital environment, by analyzing the polymorphism of the 3’ terminal region of the coagulase gene (coa PCR) and 16S-23S intergenic region of the ribosomal operons (PCR-ribotyping). The genotypes of toxigenic genes found among the S. aureus isolates were seg singly or seg in the combinations seg + sec, seg + sea, seg + seb, seg + tst, seg + eta, seg + seh, seg + sec + tst, seg + sea + seh, and seg + sea + seb + seh. The most frequent gene was seg, present in all the positive specimens, 79/79 (100%), followed by she, 10/79 (12.7%) and sea, 9/79 (11.4%). coa PCR revealed four coagulotypes (profiles 1-4), where the most prevalent, profile 2 (~800 bp), was found in 39/80 (48.75%). PCR-ribotyping demonstrated 3 to 7 fragments of 390 to 680 bp, distributed among eleven ribotypes (R1-R11). R1 and R4 were the most common ribotypes, present in 28.75% of the strains studied. The coagulotypes and ribotypes were distributed in the three sectors of the hospital (outpatient clinic, wards and ICU). These findings reveal a great genetic polymorphism and demonstrate a clonal dispersion of S. aureus in this hospital environment.
keywords: Staphylococcus aureus
Exotoxinas
Ribotipagem
Coagulase
Saúde pública
Issue Date: 2008
Citation: ANDRADE, Mariana de Azevedo. Tipagem molecular e investigação dos genes toxigênicos em Staphylococcus aureus isolados de amostras clínicas. 2008. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública) - Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Fundação Oswaldo Cruz, Recife, 2008.
Place of defense: Recife
Department: Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães
Defense institution: Fundação Oswaldo Cruz
Copyright: open access
Appears in Collections:PE - IAM - PPGSP - Dissertações de Mestrado

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